荧光探针汇总[精选.]

钙离子后在

330-35 0nm

激发光下可以产生较强的荧光，而在

380nm

激发光下则会

导致荧光减弱。这样就可以使用

3 40nm

和

380nm

这两个荧光的比 值来检测细胞内

的钙离子浓度，

可以消除不同细胞样品间荧光探 针装载效率的差异，

荧光探针的渗

漏，细胞厚度差异等一些误差 因素。

生理意义

< br>细胞内钙离子增多是细胞损伤的结果，因此此探针能表征细胞损伤程度

激发波长为

340nm

和

380nm

发射波长

510nm

（蓝色）

备注

仪器滤光片不适用

3

Fluo-4-AM

（钙离子荧光探针）

原理

Fluo 4

是一种将

Fluo 3

结构中的

Cl

替换成

F

的钙荧 光探针。由于将

Cl

替换成了

电子吸引 力更强的

F

，

它的最大激发波长会向短 波长处偏离

10 nm

左右。

所以用氩

激光器激发时，

Fluo 4

的荧光强度比

Fluo 3

强

1

倍。

由于

Fluo 4

与钙离子的亲和力

和

Fluo 3

近似，所以使用上和

Fluo 3

也基本相同

生理意义

细胞内钙离子增多是细胞损 伤的结果，因此此探针能表征细胞损伤程度

激发波长

494nm

发射波长

516nm

（绿色）

备注

用激光器激发时荧光强度强，因此不推荐

4.

DCFH-DA

（活性氧荧光探针）

原理

DCFH-DA

本身没有荧光，< /p>

可以自由穿过细胞膜，

进入细胞内后，

被 细胞内的酯酶

水解生成

DCFH

。而< /p>

DCFH

不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细

胞内的活性氧可以氧化无荧光的

DCFH

生成有荧光的

DCF

。

生理意义

检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度

激发波长

485nm

发射波长

520nm

（绿色）

备注

推荐使用

5.

DHR 123

（活性氧荧光探针）

原理

本身无荧光

,

在超氧化酶存在时可被过氧化氢

(H2O2)

氧化

,

转变成发射绿色荧

光的罗丹明

123

(Rhodamine

123),

因此广泛应用于检测细胞内活性氧

(ROS),

如过氧化

物

,

次氯酸和过氧亚硝基阴离子等。

生理意义

检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度

激发波长

507nm

发射波长

529nm

（绿色）

备注

氧化后成罗丹明

123

，荧光强度可能受到线粒体膜电位的影响

6.

RhodamineI23

（线粒体膜电位荧光探针）

原理

细胞膜通透的阴离子绿色荧光染料

,

能够迅速被活线粒体摄取

,

而无细胞毒性。

生理意义

标记线粒体膜电位

激发波长

488nm

发射波长

515 ~ 575nm

（绿色）

生理意义

检测线粒体膜电位

word.

备注

正在使用

7.

Hoechst 33342

（

DNA

荧光探针）

< br>

原理

Hoechst 33342

是一种可对

DNA

染色的 细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测。

Hoechst

染料可 透过细胞膜在聚

AT

序列的富集区域的小沟处与

DNA

结合并对

DNA

染色而 发出强烈的蓝色荧光。

生理意义

标记双链

DNA

激发波长

355nm

发射波长

465nm

（蓝色）

备注

正在使用

8.

FDA

原理

FD A

可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。

生理意义

反映细胞膜完整性和细胞活力

激发波长

495nm

发射波长

520nm

（绿色）

备注

正在使用

9.

PI

（

DNA

荧光探针）

原理

它不能透过完整的细胞膜，但能 透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的膜而将细胞核

染红，

与细胞核 中的

DNA

结合的

PI

发出的荧光，

与未结合的

PI

相比，

强度会增

强

20-30

倍。

生理意义

检测死细胞及凋亡晚期细胞

激发波长

530nm

发射波长

615nm

（红色）

备注

尝试过，但效果不好

10.

EB

（核酸荧光探针）

原理

EB

， 不能透过细胞完整的细胞膜。溴化乙锭含有一个可以嵌入

DNA

堆积碱基之

间的一个三环平面基团。它与

DNA

的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子

强度的饱和溶液中，大约每

2.5

个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入

< br>后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基

团 的固定位置及其与碱基的密切接近，导致与

DNA

结合的染料呈 现荧光，其荧

光产率比游离溶液中染料有所增加。

生理意义

检测死细胞

激发波长

545nm

发射波长

605nm

（红色）

备注

有强致癌性，不推荐

11.

DAPI

< br>（

DNA

荧光探针）

原理

DAPI

可以穿透细胞膜与细胞核中的双链

DNA

结合而发挥标记的作 用，

产生比自

身强

20

多倍的荧光，且对活细胞无毒副作用。和

EB

相比，对 双链

DNA

的染色

灵敏度要高很多倍。

DAPI

也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双< /p>

链

DNA

染色。

生理意义

标记凋亡和死细胞的

DNA

激发波长

364nm

发射波长

454nm

（蓝色）

备注

与

Ho echst

功能相近，可以尝试

12.

Calcein AM

原理

Calcein-AM

由于在

Calc ein(

钙黄绿素

)

的基础上加强了疏 水性，

因此能够轻易穿透

活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶 会将其水解为

Calcein(

钙黄绿素

)

留在细胞

内

,

发出强绿色荧光，且细胞毒性很低，适合用于活细胞染色。

生理意义

检测细胞膜完整性

激发波长

494nm

发射波长

517nm

（绿色）

word.