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1.
Fluo-3 AM
(钙离子荧光探针)
原理
Fluo-3
AM
是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。
Fluo-3 AM<
/p>
的荧光非常弱,进入细
胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成
Fluo-3
,从而被滞留在细胞内,和细胞内游离
的钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光。
生理意义
细胞内钙离子增多是细胞损
伤的结果,因此此探针能表征细胞损伤程度
激发波长
506nm
发射波长
526nm
(绿色)
备注
推荐使用
2.
Mag-fura-2
AM
(钙离子荧光探针)
原理
Fura-2 AM
是一种可以穿
透细胞膜的荧光染料。
Fura-2?AM
进入细胞后可以被细
胞
内的酯酶剪切形成
Fura-2
,从
而被滞留在细胞内。
Fura-2
可以和钙离子结合,结合
p>
钙离子后在
330-350nm
激发光下可
以产生较强的荧光,而在
380nm
激发光下则会
导致荧光减弱。这样就可以使用
340nm
和
380nm
这两个荧光的比值来检测细胞内
的
钙离子浓度,
可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异,
荧光探针的渗
漏,细胞厚度差异等一些误差因素。
生理意义
细胞内钙离子增多是细胞损
伤的结果,因此此探针能表征细胞损伤程度
激发波长为
340nm
和
380nm
发射波长
510nm
(蓝色)
备注
仪器滤光片不适用
3
Fluo-4-AM
(钙离子荧光探针)
原理
Fluo 4
是一种将
Fluo 3
结构中的
Cl
替换成
F
的钙荧
光探针。由于将
Cl
替换成了
电子吸引
力更强的
F
,
它的最大激发波长会向短
波长处偏离
10 nm
左右。
所以用氩
激光器激发时,
Fluo
4
的荧光强度比
Fluo 3
强
1
倍。
由于
Fluo
4
与钙离子的亲和力
和
Fluo
3
近似,所以使用上和
Fluo
3
也基本相同
生理意义
细胞内钙离子增多是细胞损
伤的结果,因此此探针能表征细胞损伤程度
激发波长
494nm
发射波长
516nm
(绿色)
备注
用激光器激发时荧光强度强,因此不推荐
4.
DCFH-DA
(活性氧荧光探针)
原理
DCFH-DA
本身没有荧光,<
/p>
可以自由穿过细胞膜,
进入细胞内后,
被
细胞内的酯酶
水解生成
DCFH
。而<
/p>
DCFH
不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细
胞内的活性氧可以氧化无荧光的
DCFH
生成有荧光的
DCF
。
生理意义
检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度
激发波长
485nm
发射波长
520nm
(绿色)
备注
推荐使用
5.
DHR 123
(活性氧荧光探针)
原理
本身无荧光
,
在超氧化酶存在时可被过氧化氢
(H2O2)
氧化
,
转变成发射绿色荧
光的罗丹明
123
(Rhodamine
123),
因此广泛应用于检测细胞内活性氧
(ROS),
如过氧化
物
,
次氯酸和过氧亚硝基阴离子等。
生理意义
检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度
激发波长
507nm
发射波长
529nm
(绿色)
备注
氧化后成罗丹明
123
,荧光强度可能受到线粒体膜电位的影响
6.
RhodamineI23
(线粒体膜电位荧光探针)
原理
细胞膜通透的阴离子绿色荧光染料
,
能够迅速被活线粒体摄取
,
而无细胞毒性。
生理意义
标记线粒体膜电位
激发波长
488nm
发射波长
515 ~ 575nm
(绿色)
生理意义
检测线粒体膜电位
备注
正在使用
7.
Hoechst 33342
(
DNA
荧光探针)
< br>
原理
Hoechst
33342
是一种可对
DNA
染色的
细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测。
Hoechst
染料可
透过细胞膜在聚
AT
序列的富集区域的小沟处与
DNA
结合并对
DNA
染色而
发出强烈的蓝色荧光。
生理意义
标记双链
DNA
激发波长
355nm
发射波长
465nm
(蓝色)
备注
正在使用
8.
FDA
原理
FD
A
可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。
生理意义
反映细胞膜完整性和细胞活力
激发波长
495nm
发射波长
520nm
(绿色)
备注
正在使用
9.
PI
(
DNA
荧光探针)
原理
它不能透过完整的细胞膜,但能
透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的膜而将细胞核
染红,
与细胞核
中的
DNA
结合的
PI
发出的荧光,
与未结合的
PI
相比,
强度会增
强
20-30
倍。
生理意义
检测死细胞及凋亡晚期细胞
激发波长
530nm
发射波长
615nm
(红色)
备注
尝试过,但效果不好
10.
EB
(核酸荧光探针)
原理
EB
,
不能透过细胞完整的细胞膜。溴化乙锭含有一个可以嵌入
DNA
堆积碱基之
间的一个三环平面基团。它与
DNA
的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子
强度的饱和溶液中,大约每个碱基插
入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后,
其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力
与上下碱基相互作用。这个基团的
固定位置及其与碱基的密切接近,导致与
DNA
结合的染料呈现荧光,其荧光产
率比游离溶液
中染料有所增加。
生理意义
检测死细胞
激发波长
545nm
发射波长
605nm
(红色)
备注
有强致癌性,不推荐
11.
DAPI
< br>(
DNA
荧光探针)
原理
DAPI
可以穿透细胞膜与细胞核中的双链
DNA
结合而发挥标记的作
用,
产生比自
身强
20
多倍的荧光,且对活细胞无毒副作用。和
EB
相比,对
双链
DNA
的染色
灵敏度要高很多倍。
DAPI
也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双<
/p>
链
DNA
染色。
生理意义
标记凋亡和死细胞的
DNA
激发波长
364nm
发射波长
454nm
(蓝色)
备注
与
Ho
echst
功能相近,可以尝试
12.
Calcein AM
原理
Calcein-AM
由于在
Calc
ein(
钙黄绿素
)
的基础上加强了疏
水性,
因此能够轻易穿透
活细胞膜。当其进入到细胞质后,酯酶
会将其水解为
Calcein(
钙黄绿素
)
留在细胞
内
,
发出强绿色荧光,且细胞毒性很低,适合用于活细胞染色。
生理意义
检测细胞膜完整性
激发波长
494nm
发射波长
517nm
(绿色)