-
人乳腺癌原代培养体外药敏试验研究
100021
北京
中国医学科学院肿瘤医院肿瘤所生物检测中心
·论著·
李艳芬，田海梅，陈国际<
/p>
2
，曹冬艳，刘毅，李茉，王小兵，刘朝阳，梁智，程冬婉，张伟
1
[
摘要
]
目的
: <
/p>
探讨用
A
TP
生
物荧光肿瘤体外药敏检测技术（
ATP-TCA
）研究乳腺癌药
敏
的异质性和个体化疗的可行性。
方法
:
用
ATP-TCA
检测
114
例乳腺癌标本对
13
种
单药或联
合用药的敏感性。
结果
: <
/p>
个体之间的药物敏感性存在着明显的异质性。单药中最有效的药物
为紫杉醇、
长春瑞滨、
表阿霉素、
丝裂
霉素和阿霉素，
分别有
73.3
％、<
/p>
64.1
％、
62.3
< br>％、
49.9
％
和
40.0
％的标本对其敏感。联合用药（紫杉醇＋表阿霉素，环磷酰胺＋表阿
霉素＋氟尿嘧啶）
的敏感率高于单药。
结论：
< br>乳腺癌对抗癌药物的敏感程度存在着异质性。
ATP
生物
荧光肿瘤
药敏检测技术可用于为乳腺癌选择合适的化疗药物。
[
关键词
]
ATP
生物荧光肿瘤药敏检测技术；乳腺癌；化疗药物敏感性
中图分类号：
R737.9
文献标识码：
A
文章编号：
1009-0460(2006)00-0000-00
Evaluation of chemosensitivity of human
breast cancer determined by primary culture assay
in vitro
LI Yan-fen, TIAN
Hai-mei, CHEN Guo-ji, CAO Dong-yan, LIU Yi, LI Mo,
WANG Xiao-bing,
LIU Zhao-yang, LIANG
Zhi, CHENG Dong-wan, ZHANG Wei. Tumor Marker
Research Center,
Cancer
Hospital/Institute, Chinese Academy of Medical
Sciences, Peking Union Medical College,
Beijing 100021, China
Corresponding auther: ZHANG Wei,
E-mail: zhangww1954@
[Abstract]
Objective
To investigate the heterogeneity of
chemosensitivity in breast cancer using an
ATP-tumor chemosensitivity assay (ATP-
TCA) and the feasibility of individual
chemotherapy.
Methods
An
ATP-TCA was used to determine the
effect of 13 single or combined cytotoxic drugs in
surgical specimens
from 114 patients
with breast cancer cancer.
Results
There were
considerable differences in chemosensitivity
between individuals. The most active
single drug in the assay was identified as
Paclitaxel, Navelbine,
Epirubicin,
Mitomycin and adriamycin, 73.3%, 64.1%, 62.3%,
49.9% and 40.0% of specimens showed
sensitivity to them, respectively.
Combination of chemotherapy
(Paclitaxel+Epirubicin,
Cyclophosphamid
e+Epirubicin+5-Fluorouracil) was found to be more
effective than relative drugs alone.
Conclusions
There was the
heterogeneity of the
in
vitro
chemosensitivity in breast
cancer. The use of the
ATP-TCA provide
a method of selecting appropriate anti-cancer
drugs in breast cancer.
[Key words]
A
TP-tumor chemosensitivity
assay; Breast cancer; Chemosensitivity
1
通讯作者
张伟
Tel: , E-mail:
zhangww1954@
2 100021
北京
中国医学科学院肿瘤医院肿瘤所腹部外科
陈国际
1
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，
其发病率呈逐年上升的趋势，
并且发病年龄有下
降的趋势。
化疗是乳腺癌综合治疗的重要组成部分。由于乳腺癌对化疗药物的敏感性存在个
体差异，
因此在化疗前通过体外药敏试验为每个病人筛选敏感性药物，有针对性地用药，有
可能提
高化疗的疗效以及降低不良反应。
ATP
生物荧光肿瘤体外药敏
检测技术（
ATP-tumor
chemosensitivity
assay
，
ATP-
TCA
）是目前较为先进的体外药敏检测技术
[1, 2]
，其原理是在有
氧和
ATP
的条件下，
荧光酶催化荧光素发出荧光，
强度与
ATP
含量呈正相关。
因为细胞死亡
后，
胞内的
ATP
被迅
速水解并且活细胞中
ATP
含量基本恒定。
所以，
所测得荧光强度可间接
反映出存活细胞量。从而可根
据其判断抗肿瘤药物的药敏结果。肿瘤细胞存活率越低
,
说明肿
瘤细胞对该化疗药物敏感性越高
,
杀伤
力也越强
,
反之则敏感性越低。我们用
ATP-TCA
方法对
114
例新鲜的
初发乳腺癌手术标本进行了体外药敏检测，现报道如下。
1
材料与方法
1
.1
肿瘤标本
收集
2002
年
2
月～
2005
< br>年
2
月我院和外院的
114
例行改良根治术的乳腺癌
手术标本。其中浸润性导管癌
91
例，浸润性小叶癌
12
例，导管内癌
6
例，髓样癌
4
例，浸
润性小叶癌合并导管内癌
1
例；
TNM
分期为
I
期
22
例，
II
期
79
例，
III
期
13
例；
1
14
例患
者，年龄
31
～
72
岁，中位年龄
48
岁。均为原发肿瘤，术前未经放化疗或免疫治疗。
1.2
化疗药物
所用的化疗药物的
100
％测试药物浓度（
100
％
TDC
）见表
1
。联合用药的每
个药物的浓度与单药浓度相同。
表
1
所用的化疗药物及剂量
药物
氟尿嘧啶（
5-FU
）
健择
(GEM)
< br>足叶乙甙（
VP16
）
紫杉醇（
PTX
）
环磷酰胺
(CTX)*
阿霉素
(ADM)
表阿霉素（
EPI
）
长春瑞滨（
NVB
）
米托蒽醌
(
MITO
)
丝裂霉素
(MMC)
羟基喜树碱（
HCPT
）
100
％
TDC
（
μ
g/ml
）
25.00
25.00
20.00
10.00
2.75
1.00
1.00
1.00
0.80
0.50
0.30
*
因
CTX
在体外
无活性，实验中所采用的是
CTX
的体内活化物
4-HC
。
2
1.3
仪器和试剂
荧光测定仪
MPL1
型（德国
Ber
thold
公司）
。
ATP
生物荧光肿瘤药物敏感性
检测试剂盒，含混合消化酶、培养基、红细胞去除
液、细胞培养板（
96
孔）
、
ATP
提取液和
荧光酶－荧光素工作液（北京金
紫晶生物医药技术有限公司）
。
1.4
体外药敏检测实验
无菌取得的新鲜乳腺癌手术标本，
在
含抗生素的培养基中浸泡
25min
后，剪成
< br>0.5
～
1mm
3
碎块，置于
50 ml
离心管中，加用培养基稀释<
/p>
1
倍的混合消化酶
10ml
，
于
37
℃消化过夜。用培
养基洗涤
2
次，获得单细胞悬液。台盼蓝染色，计数活的肿瘤细
胞。
先加待测药物于
96
孔培养板，每
个药物设
100
％、
50
％、
25
％、
12.5
％和
6.25
％
T
DC
5
个浓
度，每个浓度
2
个平行孔，并设无药对照（
M0
）
，和最大抑制对照（
MI
）
。接种肿瘤细胞，细
胞数为
2×
10
4
个
/
孔。在
37
℃，
5
％
CO
2
条件下培
养
5d
后，开始测定。最大抑制对照孔加
50
μ
l
最大抑制剂，其余各孔加<
/p>
50
μ
lATP
提取液，在震荡器上震荡
30s
，室温静置
5min
。再次
震荡混匀。
每孔取
50
μ
l
液体
，
按相应的位置加到荧光测试板内，
每孔加入
< br>50
μ
l
荧光素－荧
光酶混合液。再次震荡混匀
5s
，立刻在荧光扫描
仪上测定荧光强度。
1.5
药敏检测判定标准
计算药物
IC90
< br>和
IC50
。
IC90<90%
且
IC50<25
％判定为高度敏感；
IC90<90%
或
IC50<25<
/p>
％判定为中度敏感；
IC90>90%
且
IC50>25
％判定为不敏感。
1. 6
统计学分析
用
SPSS 10.0
软件进行统计分
析，组间数据比较用
χ
2
检验。
2
结果
2.1
标本的可评价率
本研究收集的
114
例标本中，有
104
例进行了成功的体外药敏检测，<
/p>
可评价率为
91.2
％。
10
例不成功的标本中，
8
例
来自
I
期患者，
2
例来自
II
期患者，均是由
于标本
较小，获得的细胞数太少而放弃检测。
2.2
乳腺癌标本的药物敏感性个体差异性
104
例乳腺癌标本进行了
4
至
13
种单药和
/
或联合
用药的药敏检测，其中
56
份仅选用了
4
～
11<
/p>
种单药，其余
48
例选用了单药和联合用
药。
104
例标本中，有
30
例（
28.8
％）有至少
1
个高敏感药物，其余
74
例（
71.2
％）有至少
1
个中度
敏感药物。附图显示的是
2
例典型化疗药物体外抑制肿瘤生长曲线。图
A
所示的病例对
PTX
高度敏感，而图
B
< br>所示的病例对
ADM
高度敏感。可见乳腺癌标本的药物敏
感性存在个体差
异。
3