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抗肿瘤药物对肿瘤细胞抑制及细胞形态观察
实验导读
细胞是生物体形态结构、生
理功能和发育分化等生命现象的基本单位。人体
细胞种类繁多
,
大小不一
,
形态多样
< br>,
结构和功能都不同
。
每个细胞
都由细胞膜、
细胞质和细胞核三部分组成。各种细胞具有一定的形态结构特点,合成与功
能相
关的特殊蛋白质,表达某种代谢特点和功能活动,即为细胞的表型。为观察不同
p>
细胞或细胞在不同环境下的状态,染色是最常用、且最直观的方法。
染色是组织或细胞的某些成分与染料的化学结合或物理吸附作用而显色的
过程。
染料是一种有机化合物,它们含有不饱和的基团,例如亚硝基
(-
N=O
)
、
偶氮基(-
N=N
-)等称为发色团。各种染料
由于它们的发色团不同,显示的颜
色就不同。此外,染料还含有一些碱性基团如氨基(-
NH
2
)或酸性基团如羧基
(-
COOH
)或磺基(-
SO
3
H
)
,称为助色团。含有氨基的染料是碱性染料,它
在溶液内带阳电荷,为阳离子染料,它和
组织内的酸性物质有亲和力。含有羧基
和磺基的染料是酸性染料,它在溶液内带阴电荷,
为阴离子染料,它与组织内的
碱性物质有亲和力。
5-
氟尿嘧啶作为嘧啶类似物
,
< br>用于固体瘤的治疗已经有近
50
年的历史。
目前
作为首选抗代谢药用于临床治疗胃癌、
乳腺癌等
多种癌症。
5-
氟尿嘧啶在细胞内
先转
变为
5-
氟
-2-
脱氧尿嘧啶核苷酸,后者抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶,阻断脱
氧尿嘧啶核苷酸转变为
脱氧胸腺嘧啶核苷酸,
从而抑制
DNA
的生物合成。
此外,
通过阻止尿嘧啶和乳清酸掺入
RNA
,
达到抑制
RNA<
/p>
合成的作用。
为细胞周期特
异性药,主要
抑制
S
期细胞。
各种组织或细胞的基本组成成分都是蛋白质、糖蛋白、或脂蛋白,蛋白质分
子中既含
有碱性的氨基,有含有酸型的羧基,它是两性电解质。氨基和羧基在溶
液内均可电离,如
羧基的电离大于氨基时则蛋白质带阴电荷,此时它和阳离子的
碱性染料亲和力大;如氨基
的电离大于羧基时则蛋白质带阳电荷,此时它和阴离
子的酸性染料亲和力大。在一定的<
/p>
pH
值时,某种蛋白质带有阴电荷和阳电荷的
数目相等,此
pH
为该种蛋白质的等电点,此时蛋白质为不
带电荷的两性物质,
着色不佳。如溶液的
pH
< br>值高于等电点时,对该种蛋白质来说为碱性溶液,蛋白
质释出
H
+
,
蛋白质带阴电荷,它可与阳
离子碱性染料结合。如溶液的
pH
值低于
等电点时,对该种蛋白质来说为酸性溶液,蛋白质释出
H
+,
蛋白质带阳电荷,
它可与阴离子酸性染料结合。常用的酸性染料如伊红、橙黄
G
、光绿等,碱性染
料如苏木精、碱性
品
红、亚
甲
蓝等。
细
胞或组
织学中最常
用的
是苏
木精
(
Hematoxylin )
和伊红
( Eosin )
染色法,简称
HE
染色法。经苏木精染色后,
细胞
核和细胞质内的嗜碱性物质着蓝紫色,可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝,如
p>
处理适宜,可使细胞核着清楚的深蓝色,胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料
伊红染胞浆,使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或
细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。
一、实验目的
1.
观察抗肿瘤药物对肿瘤细胞的抑制
2.
观察抗肿瘤药物对肿瘤细胞形态的影响
3
.掌握
苏木精
-
< br>伊红染色
的原理
4
.熟悉细胞染色的方法
二、实验原理
药物与细胞共孵育后,
会干扰正常细
胞的代谢,
干扰的结果会以细胞内蛋白、
DNA
和
RNA
的改变表现出来。
通
过染色的方法,
可以观察细胞整体形态、
细胞
< br>内蛋白、
DNA
和
RNA
的形态,
与正常细胞做比较,
就能观察到药物
对细胞形态
的影响。
苏木精在碱性溶
液中呈蓝色,使细胞核被染成蓝紫色。伊红是一种化学合成
的酸性染料,在水中离解成带
负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷的阳离子
结合使胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌
肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同
程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明
对比。
三、仪器和试剂
仪器:
倒置相差显微镜,超净工作台,细胞孵箱
试剂:<
/p>
95%
乙醇,苏木精,盐酸,伊红,冰乙酸,硫酸铝钾,碘酸钠,
甘油,
1640
细胞培养液,
DMEM
细胞培养液,小牛血清。
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