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细胞爬片
HE
染色<
/p>
SOP
一、
原理
苏木素（
Hematoxylin
）－伊红（
Eosin
）染色法，简称
HE
染色法。
HE
染色法采用两种染料即碱性染料苏木素和酸性染料伊红
分别于细胞核和
细胞质发生作用，
使细胞的微细结构通过颜色而
改变它的折光率，
从而在光镜下
能清晰地呈现出细胞图像。
该染色过程既有化学反应，
又有物理作用参与。
从化
学反应看，
组织细胞内含有酸性物质和碱性物质，
细胞的酸性物质与碱性染料的
阳离子结合，
而细胞核的碱性物质与酸性染料的阴离子结合，
使其中酸性细胞核
被碱性的苏木素染成蓝色，
而碱性的胞浆被酸性染料伊红染成红色。
< br>其结果胞核
呈蓝色，胞浆呈红色。从物理现象看，主要有吸附、吸收之说。
HE
染色提供良
好的核浆对比染色，是细胞化
学染色最常用的一种方法。
二、
实验用品
1
、固定液：常用
95
％乙醇和冰丙酮
2
、苏木精染液：称取苏木精粉
0.5
g
，铵矾
24g
溶解于
70ml
蒸馏水中，然后
取
N
aIO 31g
，水
5ml
，再加入甘
油
30ml
和冰醋酸
2ml
，混合均匀，滤纸
过滤，备用。
3
、伊红染液：称取
0.5g
水溶性伊红染液，溶于
100ml
蒸馏水中。
< br>
4
、稀盐酸乙醇溶液：用
75
%
乙醇配制
1
％盐酸。
5
、系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。
6
、培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻
片、显微镜。
三、
实验步骤
1
、样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约
1
×
10
5
/ml
，
滴加于盖玻片上（置于
6
孔板中）
，培养相应时间后，取出细胞爬片，用
PBS
< br>洗涤
3
次。
< br>2
、样品固定：
95
％乙醇固定
20min
，
PBS
< br>洗涤
2
次，每次
1min
。
3
、染核：苏木
素染液染色
2
－
3min
，自来水洗涤。
4
、分色
：镜下观察，若细胞核染色过深，用
1
％盐酸酒精溶液分色数秒
，自
来水洗涤。
5
< br>、染胞质：浸入伊红染液染色
1min
，自来水洗涤。<
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