-
一、方法验证
1
．
准确度
该指标主要是通过回收率来反映。
验证时一般要求分别配
制浓度为
80
％、
1
00
％和
120
％的供试品溶液各三份
，分别测定其含
量，将实测值与理论值比较，计算回收率。
<
/p>
可接受的标准为：各浓
度下的平均回收率均应在
< br>98.0%-102.0%
之间，
9
个回收率数据的相对
标准差（
RSD
）应不大于
2.0%
。
2
．线性
线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方
法为：
在
80
％至
1
20
％的浓度范围内配制
6
份浓度不同
的供试液，
分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（
X
）
，峰
面积为纵坐标（
Y
）
，进行线性回归分析。
可接受的标准为：回归线
的相关系数（
R
）不得小于
0.998
，
Y
轴截距应在
100
< br>％响应值的
2
％
以内，响应因子
的相对标准差应不大于
2.0%
。
3
．精密度
1
）重复性
配制
6
份相同浓度的供试品溶液，由一个分析
人员在尽可能相同
的条件下进行测试，
所得
6
份供试液含
量的相对标
准差应不大于
2.0%
。<
/p>
2
）中间精密度
配制
6
份相同浓度的供试品溶
液，
分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得
12
个含量数据的相对标准差应不大于
2.0%
。
< br>
4
．专属性
可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关
物质应能完全分离
，分离度不得小于
2.0
。以二极管阵列检测器进行
纯度分析时，主峰的纯度因子应大于
980
。
5
．检测限
主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于
3
。
6
．定量限
主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于
10
。另外
，配制
6
份最低定量限浓度的溶液，所测
6
份溶液主峰的保留时间的相对标
准差应不大于
2.0%
。
7
．
耐用性
分别考察流动相比例变化±
5
％、
流动
相
pH
值变化±
0.2
、
柱温变化±
5
℃、流速相对
值变化±
20
％时，仪器色谱行为的变化，
每个条件下各测试两次。
可接受的标准为：
主峰的拖尾因子
不得大于
2.0
，主峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的
含量数据（
n=6
）
的相对标准差应不
大于
2.0%
。
8
、
系统适应性
配制
6
份相同浓度的供试品溶液进行分析，
主峰峰面
积的相对标准差应不大于
2.0%
，主峰保留时间的相对标准差应不大
于
1.0
%
。另外，主峰的拖尾因子不得大于
2.0
，主峰与杂质峰必须达
到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。
二、
分
析
方
法
验
证
（
Validation
）
进行验证，
以证明分析方法符合检测的目的和
要求，
这就是分析方法
验证。从本质上讲，方法验证就是根据检
测项目的要求，预先设置一
定的验证内容，
并通过设计合理的试
验来验证所采用的分析方法符合
检测项目的要求。
方法验证在质
量控制上有重要的作用和意义，
只有
经过验证的分析方法才能用
于药品生产的分析检测，
方法验证是制订
质量标准的基础。
方
法
验
证
内
容
包括方法的专属性、
线性、
范围、准确度、精密度、检出限、定量限、耐用性和系统适用性等
，
检测目的不同验证要求也不尽相同。
1.
专
属
性
（
Speciality /
Specificity
）
专属性是
指分析方法能够将产品和杂质分开的特性，也称为“选择
性”
。
对于纯度检测，可在标准品中加入产品中的已知杂质，或者直
接用粗品，考察产品峰是否
受到杂质的干扰，对于过程跟踪，可用
反应体系样品来考察有没有其它的杂质干扰。必要
时使用二极管阵
列检测器或者质谱检测器进行色谱峰纯度检查。一般要求产品和杂
质之间的分离度大于
2.0
。
2.
线
性
（
Lin
earity
）
线性是在设定的
范围内，
检测结果与样品中原料或产品的浓度呈线性
关系的程度
。
线性是定量检测的基础，
需要定量检测的项目都需要验
证线性。一般用贮备液经过精密稀释，或分别精密称样，制备得到一
系
列被测物质的浓度（
5
个以上）
，按浓
度从小到大运行序列，以峰
面积和浓度的函数作图，
用最小二乘
法进行线性回归计算，
考察分析
方法的线性。
< br>
3.
范
围
（
Ran
ge
）
范围指在能够达到一定的
准确度、
精密度和线性时，
样品中被分析物
的浓度区间。
简单的说，
范围就是分析方法适用的样品中待
测物的浓
度最大值和最小值。
需要定量检测的分析方法都需要对
范围进行验证，
纯度检测时，范围应为测试浓度的
80
％～
120
％。
4.
准
确
度
（
Accuracy
）
准确度是指测定的结果与真实值之间接近的程度，
所
以也叫做
“真实
度”
，需要定量得分析
方法均需要验证准确度。准确度应在规定的范
围内建立，
对于原
料药可用已知纯度的标准品或符合要求的原料药进
行测定，必要时可与另一个已建立准确
度的方法比较结果。