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四川大学实验报告
题目:巨噬细胞吞噬作用的观察
一.
实
验目的
1.
通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞
噬作用的观察,了解巨噬
细胞在非特异性免疫中的功能。
2.
掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
3.
学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。
二.
实
验原理
1.
向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤
,排异反应使小鼠产生大量
巨噬细胞,
且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤
后不会对细胞造成伤害,
反而被“喂养”
。连续多天注射使小鼠
腹腔内聚集大量巨噬细
胞。
2.
台盼蓝是一种生物染料,
专一染色死细胞。
活细胞的细胞质膜
对台盼蓝
有不透过性。巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤
后,
可以消化
其中的淀粉和蛋白质,
但是不能消化其中的台盼
蓝,
因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。
是一种溶酶体染色的方法。
3.
当向小鼠腹腔中注射
鸡红细胞时,
鸡红细胞作为外源物质,
会
被小鼠细胞识别并吞噬,
在适当的的时机,
我们就有可以在显
微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程
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四川大学实验报告
三.
实
验材料及设备
1.
实验材料:
a)
连续
2
~3
天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只
b)
鸡红细胞悬液
c)
生理盐水
2.
实验设备:
a)
普通光学显微镜
b)
载玻片、盖玻片若干
c)
注射器
d)
染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等
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四川大学实验报告
四.
实
验方法及步骤
1.
小鼠处理与巨噬细胞采集
a)
连续
2
-3
天(每天一次)向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀
粉肉汤。<
/p>
b)
选择已
注射淀粉肉汤
3
小时以上的小鼠一只。
c)
一人控制住小鼠,露出腹部,另
一人用注射器向小鼠腹腔
中注射
1ml
鸡红细胞悬液。按摩小鼠腹部。
d)
20-30
分钟后,再注射
1-1.5
ml
生理盐水(
0.9%NaCl
)按
摩小鼠腹部。
e)
3
分钟后,引颈法处死小鼠
f)
迅速在腹腔剪开一个不大的开口
(注意要剪开腹部的肌肉
层)
,用无针
头的注射器吸取腹腔液。
g)
p>
在载玻片上滴
2-3
滴腹腔液,加上盖玻片
,在显微镜下观
察。
2.
观察
在不同倍数下观察样本,
找到正在消化或者吞噬鸡红细胞
的巨噬细胞。注意避免玻片液体干涸。
五.
实
验结果
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