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糖化血红蛋白（
HbA1c
）测定的原理方法及
临床意义综述
2007
年
3
月
19
日
糖化血红蛋白（
HbA1c
）测定的原理方法及临床意义综述<
/p>
冯念伦
范卫华
刘捍东
（山东省立医院
济南
250021
）
糖尿病
(DM),
< br>主要是
2
型糖尿病的发病率，目前在世界上无论发达国家
还是发展中国家均明
显增加，占免疫病的比率，在发达国家高达
2-5%
，而我国糖尿病的发病率亦达
2-3%
，并
且每年还以
1‰
的速度增
长。
糖尿病是一种终生性疾病，
其并发症已经成为病人至残和早
亡
的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。
有资料说美国用于糖尿病的治疗费约有
1000
亿美元，
糖尿病已经成为世界各国的主要保健
卫生问题，<
/p>
对糖尿病及其并发症防治的研究是
2
０世
纪后２０年国际卫生保健研究的重点之
一。
< br>临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，
而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，<
/p>
对确诊有局
限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白
（
HbA1c
）浓度相对稳定，其浓度值
能准确反映最近
2-3
个月期间的血糖水平，
便于医生对糖尿病进行早期诊断；
也可用于糖尿
病人的
血糖监控及慢性并发症的判断等，
受到临床的广泛重视，
目前我
国各大、
中型医院正
逐渐开展糖化血红蛋白（
< br>HbA1c
）占总血红蛋白（
Hb
）的百分含量的测定项目。有些发达
国家已将
HbA1c
的测定列入中老年人的常规体检项目。
测定
HbA1c
有多种方法，
目前临床
上比
较常用的方法有两种：
乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法；
分别用生化分析仪
和糖化血红蛋白自分析仪进行测定。
1
、
糖化血红蛋白（
HbA1c
）的形成及特点
血液中红细胞内的血红蛋白
Hb
会在高糖的作用下发生缓慢的非酶促糖化反应
,
< br>血红蛋白
Hb
的
β
链
N
末端缬氨酸上的氨基与葡萄糖的醛基发生可逆的
加成反应
,
，形成不稳定的中
间产物<
/p>
---
醛亚胺（前
GHbA1c
）迅速重排成不可逆的酮胺，然后缓慢重构形成
HbA1c
。
糖化血红蛋白
HbA
1c
的特点：
1
．
1
糖化
血红蛋白
HbA1c
的百分比含量与即时所检测到的血糖水平无
关。
1
．
2
由于红细胞在外周血中的寿命是
90
－
120
天，所以糖化血红蛋白
HbA
1c
百分比反映
了测定前２－３个月的血糖平均水平。而
GHbA1c
的合成始终在进行，其糖化程度与血液
< br>中的葡萄糖浓度及持续时间呈正相关；
病人用药治疗后，
较血糖、
尿糖含量下降晚３－４周，
糖化血红蛋白
HbA1c
的百分比含量是对糖尿病长期控制有重要意义的一项指标
。
2
、
测定糖
化血红蛋白
HbA1c
的方法
测定糖化血红蛋白
HbA1c
的方法有（
1
）离子交换高压液相色谱法
HPLC
；包括：离子交
换色谱及亲和色谱；（<
/p>
2
）
微柱法；
（
3
）免疫分析法，包括：放射免疫法、酶免疫法和乳
胶免疫凝集法。（
3
）
电泳法
（
4
）电喷离子质谱等。
2.1
、离子交换色谱分析法的原理：用高效微粒离子交换剂作固定相，以具有一定
pH
值的
缓冲溶液作流动相，
依据
离子型化合物中各离子组分与离子交换剂上表面带电荷基团进行可
逆性离子交换能力的差
别而实现分离。
离子交换剂可以分成两种：阳离子交换剂和阴离子交换剂。
亲和色谱法是利用生物高分子能与相应的专一配基分子
可逆结合的原理将配基通过共价
键牢固地结合于固相载体上制得亲和吸附系统。带有杂质
的高分子分离目的物在一定条件
下，能以某种次级键与已固相化的配基结合，
而杂质则不吸附，除去杂质后变换条件，
又可
以使
待分离的高分子物质重新解离，获得纯化。
化糖血红蛋白被一
种牢固的但可逆的五环络合物所结合，通过它们的顺
-
乙二醇基
被硼酸固
定住。
首先洗脱的是非糖化血红蛋白，
随后用含有山梨醇的缓冲液将糖化组分洗脱下来，
此
缓
冲液与结合在柱上的糖化血红蛋白竞争硼酸结合位点。
2.2
、免疫分析法使用单克隆或多克隆抗体直接测定血红蛋白
β
-
链上糖基化的
N
末端的
4-8
个氨基酸，因此对
HbA
1c
上的糖基特异性好。
但是许多同
源的糖化血红蛋白变体也有相同的
N
末端结构，从而对结果造成
干扰。
2.3
、电泳法的分析原理是
：非糖化血红蛋白游离的氨基末端能与硫酸根反应，改变分子的
电泳迁移率。
而化糖血红蛋白不能与硫酸根反应，
电泳迁移率不变。
血红蛋白容易受到琼脂
板介质中磺酸盐基团或以醋酸纤维膜作支持物的缓冲液中的硫
酸右旋糖的硫酸盐基团作用，
经过电泳分离，可以将糖化血红蛋白从血红蛋白中分离出来
。
2.4
、电喷离子质谱
(electrospray ionization mass spectrometry, ESI-MS)
法
研究证明，
ESI-MS
法测出的是真
正的
HbA1c
，而目前临床上使用的各种方法测出的实际
上是一系列混合物，
包括糖化的
a
链、
a
链和
b
链双糖化及
b
链其他部位被糖化的产物。
因
此，
用
ESI-M
S
法测出的数值要低于目前临床习用的各种方法。
由于
ESI-MS
法对仪器设备
的要求较高，目前尚
难广泛用于临床。
3
、
临床常
用的测定糖化血红蛋白
HbA1c
的方法
3.1
、乳胶凝集反应法
乳胶凝集反应法是利用抗原抗体直接测定总血红蛋白
Hb
中的糖化血红蛋白
HbA1c
的百分
含量。目前有国内外几家厂商可以提供
HbA1c
测定
的试剂盒。这种免疫反应是由被测血样
品中的总
Hb
和
HbA1c
与试剂中的抗体结合而形成凝集，<
/p>
凝集量随
HbA1c
浓度的大小而变
化。使用生化分析仪器来进行比浊测定
HbA1c
< br>的浓度，采用终点法，生化仪通过测定反应
液的吸光度值，可直接反映出凝集量的
多少；推算出
HbA1c
占
Hb
的百分含量，测定时，
仪器多采用
660nm
单色光做主波长，
800nm
单色光做
副波长，通过标准曲线得出实测值。
由于这种试验其标准曲线是非线性的，所以在测定前
，首先用随试剂盒一起带有的
5
种不
同
浓度的定标液，做出
5
点非线性标准曲线。曲线和数值存在生化
仪的贮存器中，测定样
品时，实测出的吸光度值
A
与标准曲线比较，由仪器
CPU
求出实测样品中的<
/p>
HbA1c
百分
含量。乳胶凝集反应法测
定
HbA1c
简便、不用增加仪器，可直接用自动生化分析对样
品进
行快速测定。该方法也可以用手工的方法，在酶标仪进行测定，是目前使用较多的方
法。但
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