电转细胞实验转染细胞方法

电转细胞实验转染细胞方法

1)

细胞铺板，使细胞在电转当天有

70~90%

汇合率；

2)

配置

RNP

反应体系

3) 20

分钟之内，用胰酶消化细胞，并洗去迹量的胰酶（胰酶残留

会造成其对

Cas9

蛋白的降解）

，重悬细胞到

10 mL

培养基中，

并计数；

4)

取

5

倍于

0.2~1×10 6

细胞量到新的

EP

管中，

500×g

离心

5

分

钟收集细胞，并用

PBS

清洗一次细胞，重新离心；

5)

使用

5

倍于

30 μL

电转液重悬细胞；

6)

准备预先在

24

孔（

0.5 mL

）或

6

孔（

2 mL

）板中加入适量培养

基，用于后期电转细胞培养；

7)

将

30 μL

电转液重悬细胞加入到各

RNP

反应

EP

管中，并轻轻

混合；

8)

取

60 μL RNP

和细胞混合液到吉玛电转仪（

96

孔

电转）

，使用

300V

，电击

6

次；