-
对重叠延伸
PCR
技术原理理解及举例分析
The undersdanding and
analysis of the SOE PCR
摘要：
以
南通市
2012
届高三第一次调研考试中的压轴题为例，
简单分析了重叠延伸
PCR
技术的概念和原理
。
关键词：重叠延伸
PCR
；概念原理；举例分析
中国图书分类号：
G633.91
文献标识码：
A
最近进行的南通市<
/p>
2012
届高三第一次调研考试中，生物试题的压轴题是一道与重
叠延
伸
PCR
技术的相关的试题，受该
题的启发，笔者对重叠延伸
PCR
技术做了一些肤浅的总结，<
/p>
不妥之处敬请同行斧正。
1.
重叠延伸
PCR
技术的概念
< br>
重叠延伸
PCR
技术
(SOE PCR)
是指在
PCR
技术的基础上，采用具有互补末端的引物
,
使
PCR
产物形成了重叠链
,
< br>通过重叠链的延伸
,
将不同来源的片段重叠拼接起来的一
项新技术。
该技术可以很快获得依靠其它限制性内切酶消化的方法难以得到的产物，其成
功的关键是
重叠互补引物的设计。
SOE
PCR
在基因的定点突变、长片段基因的合成、基因敲除以及目的
< br>基因的扩增等方面有着独特的应用。
2.
重叠延伸
PCR
技术的原理
重叠延伸
PCR
的的原理并不复杂
，
如果有两个基因或者一个基因和一个终止子，
现在要
将他们连接到一起，
我们最先想到的是借助于内切酶和
< br>DNA
连接酶的方法，
但我们有时并不
< br>一定能找到合适的限制性酶切位点，
或者找到了，
但这些
酶又非常的昂贵，
而且可能只用一
次，这样购买这些酶就变成了
浪费，在这种研究背景下，重叠延伸
PCR
技术就应运而生了。
比如有两个基因，一个命名为
M
，一个命名为
N
，基因
M
和
N
序列如下所示：
M
的序列为
5’
-ATGCATGCTAGCTAGAACGCTACGCTGACTACCCCCTGATC
-3
’
N
的
序列为
5
’
-ATGCTAGTAGC
TAGCCCCCCCCAGGGGATAATTTTTTAAAACG-3
’
现在要将它们连接到一起，首先必须要设计引物，假设引物的序列为：
M
1
:5<
/p>
’
-ATGCATGCTAGCTAGAACGCT-3
’
M
2
:5
’
-GGGGGGCTAGCTACTAGCA
TGATCAGGGGGTAGTCAGCGT-3
’
N
1
:5
’
-ACGCTGACTACCCCCTGATCATGCTAGTAGCTAGGGGGGG-3
’
N
2
:5
’
-CGTTTTAAAAAATTA
TCCCCT-3
’
该过程的目的是
将基因
M
、
N
通过
PCR
的方法连接起来，我们观察上面的引物
M
2
和
N
< br>1
，
会发现它们要比另外两条引物长很多，
为什么要进行这样设计呢？原来这是因为在设计的时
候将
M
2
的
3
’端加入了
20
个
N
< br>基因
5
’端的序列，在
N
1
的
5
’端加入了<
/p>
20
个
M
基因<
/p>
3
’端
的序列，然后再进行如下相关步骤
：（
1
）以
M
1
、
M
2
扩增
M
基因，
N
1
、
N
2
扩增<
/p>
N
基因（
2
）回
收
M
、
N
基因（
3
）以
M<
/p>
、
N
为共同的模板，
M
1
和
N
2
为引物，扩增
M+N
，这样就将
M+N
拼接起
来了。
3.
重叠延伸
PCR
技术的试题解析
例题：
重叠延伸
PCR
技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互
相搭桥、
互为模板，
通过多次
PCR<
/p>
扩增，从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的
DNA
、不同来源的
DNA
片段拼接等方面具
有广泛的应用前景。
下图是利用重叠延伸
PCR
技术扩增目的基因的过
程。其主要设计思路是用具有互补配对片段的引物（图中
引物
2
、引物
3
）
，分别
PCR,
获得
有重叠链的两种
DNA
片段，
再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得目的基因。
结合所
学知识，分析下列问题。
1
-
-
-
-
-
-
-
-
-
上一篇：三大岩石的转化
下一篇：高考地理复习提纲_全 (1)