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1.
Fluo-3 AM
(钙离子荧光探针)
原理
Fluo-3
AM
是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。
Fluo-3
AM
的荧光非常弱,
进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成
Fluo-3
,从而被滞留在细胞
内,
和细胞内游离的钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光。
生理意义
细胞内钙离子增多是细胞损
伤的结果,因此此探针能表征细胞损伤
程度
激发波长
506nm
发射波长
526nm
(绿色)
备注
推荐使用
2.
Mag-fura-2
AM
(钙离子荧光探针)
原理
Fura-2
AM
是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。
Fura-2?AM
进入细胞后可
以被细胞内的酯酶剪切形成
Fura-2
p>
,从而被滞留在细胞内。
Fura-2
可以
和钙离子结合,结合钙离子后在
330-350nm
激发光下可以产生较强的荧
光,而在
380nm<
/p>
激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用
340nm
和
380nm
这两个荧光的比值来检测细胞内的
钙离子浓度,
可以消除不同细胞
样品间荧光探针装载效率的差异
,荧光探针的渗漏,细胞厚度差异等一
些误差因素。
生理意义
细胞内钙离子增多是细胞损
伤的结果,
因此此探针能表征细胞损伤
程度
激发波长为
340nm
和
380nm
发射波长
510nm
(蓝色)
备注
仪器滤光片不适用
3
Fluo-4-AM
(钙离子荧光探针)
原理
Fluo 4
是一种将
Fluo 3
结构中的
Cl
替换成
F
的钙荧
光探针。由于将
Cl
替换成了电子吸引力更强的
F
,它的最大激发波长会向短波长处偏离
10
nm
左右。所以用氩激光器激发时,
Fluo
4
的荧光强度比
Fluo 3
强
1
倍。由于
Fluo
4
与钙离子的亲和力和
Fluo
3
近似,所以使用上和
Fluo
3
也基本相同
生理意义
细胞内钙离子增多是细胞损
伤的结果,
因此此探针能表征细胞损伤
程度
激发波长
494nm
发射波长
516nm
(绿色)
备注
用激光器激发时荧光强度强,因此不推荐
4.
DCFH-DA
(活性氧荧光探针)
原理
DCFH-DA
本身没有荧光,可
以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,被细胞
内的酯酶水解生成
D
CFH
。
而
DCFH
< br>不能通透细胞膜,
从而使探针很容易被装载
到细胞内。细
胞内的活性氧可以氧化无荧光的
DCFH
生成有荧光的
DCF
。
生理意义
检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度
激发波长
485nm
发射波长
520nm
(绿色)
备注
推荐使用
5.
DHR 123
(活性氧荧光探针)
原理
本身无荧光
,
在超氧化酶存在时可被过氧化氢
(H2O2)
氧化
,
转变成发
射绿色荧光的罗丹明
123
(Rhodamine
123),
因此广泛应用于检测细胞内活性
氧
(ROS),
如过氧化物
,
次氯酸和过氧亚硝基阴离子等。
生理意义
检测细胞内活性氧表征细胞损伤程度
激发波长
507nm
发射波长
529nm
(绿色)
备注
氧化后成罗丹明
123
,荧光强度可能受到线粒体膜电位的影响
6.
RhodamineI23
(线粒体膜电位荧光探针)
原理
细胞膜通透的阴离子绿色荧光染料
,
能够迅速被活线粒体摄取
,
而无
细胞毒性。
生理意义
标记线粒体膜电位
激发波长
488nm
发射波长
515 ~ 575nm
(绿色)
生理意义
检测线粒体膜电位
备注
正在使用
7.
Hoechst 33342
(
DNA
荧光探针)
< br>
原理
Hoechst
33342
是一种可对
DNA
染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋
亡检测。
Hoechst
染料可透过细胞膜在聚
AT
< br>序列的富集区域的小沟处与
DNA
结合并对
DNA
染色而发出强烈的蓝色荧光。
生理意义
标记双链
DNA
激发波长
355nm
发射波长
465nm
(蓝色)
备注
正在使用
8.
FDA
原理
FDA
可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。
生理意义
反映细胞膜完整性和细胞活力
激发波长
495nm
发射波长
520nm
(绿色)
备注
正在使用
9.
PI
(
DNA
荧光探针)
原理
它不能透过完整的细胞膜,
p>
但能透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的膜而
将细胞核染红,与细胞核
中的
DNA
结合的
PI
发出的荧光,与未结合的
PI
相比,强度会增强
20-30
倍。
生理意义
检测死细胞及凋亡晚期细胞
激发波长
530nm
发射波长
615nm
(红色)
备注
尝试过,但效果不好
10.
EB
(核酸荧光探针)
原理
EB
,不能透过细胞完整的细胞
膜。溴化乙锭含有一个可以嵌入
DNA
堆积
碱基之间的一个三环平面基团。
它与
DNA
的结合几乎没有碱基序列特异
性。
在高离子强度的饱和
溶液中,
大约每个碱基插入一个溴化乙锭分子。
当染料分子插入
后,
其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上
下碱基相
互作用。
这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,
导致与<
/p>
DNA
结合的染料呈现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增
加。
生理意义
检测死细胞
激发波长
545nm
发射波长
605nm
(红色)
备注
有强致癌性,不推荐
11.
DAPI
< br>(
DNA
荧光探针)
原理
DAPI
可以穿透细胞膜与细胞
核中的双链
DNA
结合而发挥标记的作用,
产
生比自身强
20
多倍的荧光,且
对活细胞无毒副作用。和
EB
相比,对双
链
DNA
的染色灵敏度要高很多倍。
DAPI
也常用于普通的细胞核染色以及
某些特定情况下的双链
DNA
染色。
生理意义
标记凋亡和死细胞的
DNA
激发波长
364nm
发射波长
454nm
(蓝色)
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