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【专题讨论】
Autophagy
（自噬）
自噬的研究方法：
正常培养的细胞自
噬活性很低，不适于观察，因此，必须对
自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有：
（一）自噬诱导剂
1
）
Bredeldin A /
Thapsigargin / Tunicamycin
：模拟内质网应
激
2
）
Carbamazepine/
L-690
，
330/ Lithium Chloride<
/p>
（氯化锂）
：
IMPase
抑制剂
（即
Inositol mon
ophosphatase
，
肌醇单磷酸酶）
< br>
3
）
Earle's
平衡盐溶液：制造饥饿
4
）
N-Acetyl-D-sphi
ngosine
（
C2-ceramide
）
：
Class I PI3K
Pathway
抑制剂
5
）
Rapamycin
：
mTOR
抑制剂
6
）
Xestospongin B/
C
：
IP3R
阻滞剂
< br>
（二）自噬抑制剂
1
）
3-Methyladenine
（
3-MA
）
：
（
Class III PI3K
）
hVps34
抑
制剂
2
）
Bafilomycin
A1
：质子泵抑制剂
3
）
Hydroxychloroquine
（羟氯喹
）
：
Lysosomal lumen alkalizer<
/p>
（溶酶体腔碱化剂）除了选用上述工具药外，一般还需结合
遗传学
技术对自噬相关基因进行干预：包括反义
RNA
干扰
技术（
Knockdown
）
、突变株筛选、外源基因导入等。细胞经
诱导或抑制后，需对自噬过程进行观察和检
测，常用的策略
和技术有：
1
）观察自噬体的形成
由于自噬体属于亚细胞结构，普通光镜下看不到，因此，直
接观察自噬体需在
透射电镜下。
Phagophore
的特征为：新月
状或杯状，双层或多层膜，有包绕胞浆成分的趋势。自噬体
（
A
V1
）的特征为：双层或多层膜的液泡状结构，内
含胞浆
成分，如线粒体、内质网、核糖体等。自噬溶酶体（
A<
/p>
V2
）
的特征为：单层膜，胞浆成分已降
解。
（
autophagic vacuole
，
A
V
）
2
）
在荧光显微镜下采用
GFP-
LC3
融合蛋白来示踪自噬
形成：
<
/p>
由于电镜耗时长，不利于监测（
Monitoring
）自噬形成，人
们利用
LC3
在自噬形成过程中发生聚集的现象开发出了此
技术。无自噬时，
GFP-LC3
融合蛋白弥散在胞浆中；自噬形
成时，
GFP-LC3
融合蛋白转位至自噬体膜，
在荧光显微镜下
形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬
体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。
3
）利用<
/p>
Western
Blot
检测
LC3-II/I
比值的变化以评价自噬形成：
自噬形成时，胞浆型
LC3
（即
LC3-I
）会酶解掉一小段多肽，
转变为（
自噬体）膜型（即
LC3-II
）
，因
此，
LC3-II/I
比值的
大小可估
计自噬水平的高低。
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