-
固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体
的嗜碱性，
达到优良染色效果。
单纯的固定液一般难以达到这些要求，
因此在实验中使用两种混和的固定液。
由于
Carnoy
首先使用的甲醇和
冰乙酸混合液而称的
卡诺
氏固定液
是效果良好的固定液。
Carnoy
< br>固定液（甲醇
:
冰乙酸
=3:l
）
每次使用前需
临时配制
，长时间放置影响固定效果，固定时间
15
分钟至<
/p>
24
小时，冰箱、室温均可。必要时可改变甲醇和冰
乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失。
水稻根尖染色体标本制备
作者
:
biozxp
发布日期
:
2006-4-04
查看数
: 22
出自
:
1.
取材：
选取水稻种子，充分浸种后，将它们摆在铺有滤纸的培养皿内，在约
28
℃条件下发芽培养，当胚根长
至
1
～
1.5cm
时，剪下备用。
2.
预处理
压片法：采用
0.1
％秋水仙素处理<
/p>
2h
左右
去壁低渗法可采用以下四种方法处理
处理方法
0.002mol/L8-
羟基喹啉
α
－溴萘饱和溶液
< br>低温（－
4
℃）
卡诺氏Ⅰ固定液
处理时间（
h
）
1 24 24
24
注：卡诺氏Ⅰ固定液
乙醇：冰醋酸（
3
：
1
）
3.
固定
卡
诺氏Ⅰ固定液，固定时间以不超过
24h
为宜。
经过固定的材料如不及时使用，可经
90
％酒精换到
70
％酒精各半小时，再换入一次
70
％酒精，在
0
～
4
℃冰箱
内备用。
< br>
去壁低渗法
a.
将
3
固定的材料用
DDW
洗净后，
0.075mol/LKCL
溶液室温条件下处理约
30min
。
b.
酶解去壁
吸取低渗液，加入
1
％混合酶液（
1
％果胶酶与
1
％纤维素酶的混合液，均
为
Sigma
公司）
，
28
℃左
右，酶解
4.5
～
5h.
酶解过程中，将材料瓶轻轻摇动<
/p>
1
～
3
次，使材
料与酶液充分接触。
c.
后低渗
吸取酶液
,
用
DDW
< br>冲洗材料
2
～
3
次，然后在
DDW
中停留
30
min
。
d.
重固定
吸取低渗液后
,
加入新配制的卡诺氏Ⅰ固定液，固定时间约
20min
。
e.
标本制备
吸取固定液后，将根尖捣碎
,
再滴入新鲜固定液
3
～
5
滴，制成细胞悬液，
充分搅匀。吸出细胞悬液
滴于清洁载玻片上。
（为了使细胞悬液
能充分散开，
载玻片可预先放置于－
20
℃冰箱内保存，
使用时取出）
再将
载
玻片于酒精灯下来回移动，烤片。
f.
染色
改
良品红［
11
］染色
30
～
50min
。染色完毕，洗去染液，脱水透明，干
燥后镜检。
根尖压片法
解离
:
将
1
.3
固定好的材料用
DDW
冲洗
2
～
3
次，
放入盛有
1N
盐酸
（浓
盐酸：
DDW 1
：
11
）
的小瓶中，
在
60
℃
左右水浴锅中处理
15min
。解离完毕时
,
根尖分生区是乳白色
,
而根冠和伸长区则显透明。
色约
5h
。
压片
:
取染色完毕的根尖置于干净载
玻片上，切除根冠，切下根尖分生区，加入一滴清水，盖上玻片后压片。
镜检，如果染色
过深，可滴加一滴
45
％醋酸溶液分色。
染色
:
将材料水洗
3
～
5
< br>次，注意，一定要将解离液冲洗干净，否则材料不易着色。改良品红染
附录二：<
/p>
常用固定液和染色液的配制
常用固定液的配制
1.
福尔马林
-
醋酸
-
酒精固定液
(FAA)
50%
或
70%
酒精
90ml +
冰醋酸
5ml +
福尔马林
(37%~40%
甲醛
)5ml
可用作固定植物的一般组织
,
但不适用于单细胞及丝
状藻类
,
也不适宜作细胞学研究。幼嫩材料用
< br>50%
酒精代替
70%
酒精，可
防止材
略减冰醋酸，略增福尔马林。若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。久置时另加入
5ml
甘油以防蒸发和材料变硬。此液又可作保存液。
用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：
50%
酒精
89ml +
冰醋酸
6ml +
福尔马林
5ml
2.
福尔马林
-
丙酸
-
酒精固定液（
FPA
）
福尔马林
5ml +
丙酸
5ml +
50%
酒精
90ml
固定一般的植物
组织，通常固定
24h
，可长久保存。
3.
酒精
-
醋酸
-
氯仿固定液（卡诺固定液，
Ca
rnoy fixative
）
配方
Ⅰ：纯酒精
3
份
+
冰醋酸
1
份
配方Ⅱ：纯酒精
6
份
< br>
+
冰醋酸
1
份
+
氯仿
3
份
<
/p>
适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。固定时间不宜过久
。
4.
酒精
-
福尔马林固定液
福尔马林
2~6
（
6~10
）
ml +
70%
酒精
100ml
固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。通常固定
24h
，亦可长久保存。
5.
< br>酒精
-
福尔马林
-
甘油固定液
95%
酒精
150ml +
5%
福尔马林
100ml +
甘油
50ml
此液也可长期储存材料。
6.
铬酸
-
醋酸固定液
根据固定对象的不同，可分为强、中、弱
3
种配方：
（
1
< br>）弱液配方：
10%
铬酸
2.5
ml + 10%
醋酸
5ml +
蒸馏水
92.5ml
（
2
）中液配方：
10%
铬酸
7ml + 10%
醋酸
10ml +
蒸馏水
83ml
（
< br>3
）强液配方：
10%
铬酸
10ml + 10%
醋酸
30ml +
蒸馏水
60ml
弱液配方用在固定较
柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。固定时间较短，一般为数小时，最长可固定
12~24h
，但藻类和
几分钟至
1
h
。
中液配方用于固定根尖、茎尖、
未成熟子房和胚珠等。为了易于渗透，可在此液中加入
2%
的麦
芽糖或尿素。固定时间
12~24h
。
强液配方用于固定木质根、茎、成熟子房等。为了易于渗透，可在此液中加入
2%
的麦芽糖或尿素。固定时间
12~24h
或更长。
7.
铬酸
-
醋酸
-
福尔马林混合液
这
3
种药品混合在一起所配成的各种固定液，通常称纳瓦兴固定液（
Nawashi
n fixative
），简称
Craf
。配方见下表：
常备液
1%
铬酸
甲
液
10%
铬酸
铬酸
冰醋酸
纳瓦兴
原液
(ml)
15
10
Ⅰ
40
15
Ⅱ
40
20
纳瓦兴固定液
(ml)
Ⅲ
40
20
Ⅳ
8
60
Ⅴ
10
70
桑弗利斯液
(ml)
13
8
蒸馏水
乙
液
福尔马林
蒸馏水
75
40
60
45
10
90
40
10
90
40
10
80
32
20
80
20
30
70
79
64
36
甲、乙两液均为贮备液，
使用之前才将二者混合。适用于组织学和细胞学的研究材料。柔嫩而含水多的材料，可选用Ⅰ或Ⅱ固定，
用高浓度的Ⅳ或Ⅴ，一般材料多用Ⅲ。制作染色体和有丝分裂的纺锤体标本时，常用桑弗利斯固定
液。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ固定液
桑弗利斯液固定时间为
4~6h
。
8.
铬酸
-
锇酸
-
醋酸固定液（
Flemming
fixative
）
强液：
10%
铬酸水溶液
3
.1ml + 2%
锇酸的铬酸（
2%
）水溶液
12ml +
10%
醋酸水溶液
30ml +
蒸馏水
11.9ml
中液：
10%
铬酸水溶液
0
.33ml + 2%
锇酸的铬酸（
2%
）水溶液
0.62ml +
10%
醋酸水溶液
3ml +
蒸馏水
6.27ml
弱液：
10%
铬酸水溶液
1.5ml + 2%
锇酸的铬酸（
2%
）水溶液
< br>5ml + 10%
醋酸水溶液
1ml +
蒸馏水
96.5ml
此固定液需现用
现配。固定
物组织的固定。
t’s
固定液
1%
铬酸水溶液
15ml +
冰醋酸
5ml
+
福尔马林
80ml
此固定液适用于固定丝状藻类和真菌。
附录二：
常用固定液和染色液的配制
常用染色液的配制
1.
番红水液
番红
0.1g
溶入蒸馏水
,
定溶至
100ml
。
2.
番红酒液
番红
0.5g
或
1g
溶入
50%
酒精
,
定溶至
100ml
。
3.
固绿染液
固绿
0.1g
溶入
95%
酒精，定溶至
100ml
。
4.
碘
-
碘化钾染液
碘化钾溶入
100m
l
蒸馏水，再加入
1g
碘，溶解后即可
使用。
5.
苏丹Ⅲ（或Ⅳ）染液
将
0.1g
苏丹Ⅲ或Ⅳ溶解在
50ml
丙酮中，再加入
70%
酒精
5
0ml
。
6.
改良苯酚品红染液
原液
A
：将
3g
碱性品红溶入
100ml
70%
酒精，此液可长期保存。
原液
B
：将
10mlA
液加入到
90ml
5%
苯酚水溶液中。
原液
C
：将
55mlB
液加入
到
6ml
的冰醋酸和
6ml
的
38%
的甲醛中。
<
/p>
染色液：取
C
液
20ml
，加
45%
冰醋酸
80ml
，充分混匀，再加入
1g
山梨醇，放置
14
天后使用，可保存
< br>3
年。
7.
间苯三酚染液
将
5g
间苯三酚溶入
100ml 95%
酒精（若溶液呈黄色，即为失效）
。
8.
中性红染液
< br>将
0.1g
中性红溶入
100m
l
蒸馏水，用时稀释
10
倍。
9.
钌红染液
<
/p>
将
5~10mg
钌红溶入
25~50ml
蒸馏水，现用现配。
10.
龙胆紫染液
< br>将
0.2g
龙胆紫溶入
100m
l
蒸馏水。现常用结晶紫代替。必要时可将医用紫药水稀释
5<
/p>
倍后代用。
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