-
HE
染色
Hematoxylin-Eosin stains
1
脱蜡至水(
30min
)
→
流水冲洗
2
苏木精染核
20min
左右
→
流水冲洗
→
镜观
3
盐酸酒精分化
10
—
15s
→
流水冲洗
4
弱氨水返蓝
10
—
15s
→
流水冲洗
5
伊红染色
20min
左右
→
流水冲洗
6
系列酒精脱水
7
二甲苯
I
、
II
分别透明
10min
左右
8
树胶封固
结果:细胞核呈紫蓝色,细胞浆、基底膜、胶原纤维、肌纤维成粉红
色,可观察细胞的种类和数量。
HE
染色可充分显示肾小球的细胞增
生,
但不能区分内皮细胞、
系膜细胞和上皮细胞的种类。可显示
中性多核和嗜酸性粒细胞浸润。
由于上皮细胞的被覆,
肾小球基
底膜呈略厚的假象。
苏木素小体呈淡
紫红色。纤维素样坏死呈深
粉红色。碎核呈深蓝色细胞核碎片。微血
栓呈粉色。
HE
染色可以很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质
水肿以及炎细胞浸
润。
PAS
染色
Periodic acid-Schiff reaction
1
脱蜡
至水
→
流水冲洗
2
1%
过碘酸溶液
10min
→
流水冲洗
→
吹干
3
雪夫
试剂
37
度孵浴
→
镜观
→
流水冲洗
4
苏木
精染核
5min
→
流水冲洗
5
盐酸酒精分化
10
—
15s
→
流水冲洗
6
弱氨
水返蓝
10
—
15s
< br>→
流水冲洗
7
系列酒精脱水
8
二甲苯
I
、
II
分别透明
10min
左右
9
树胶封固
结果:细胞核呈蓝色,肾小球和肾小管基底膜、细胞浆、肾小球系膜
基质、胶原纤维和肌纤维等呈红色。
PAS
与
H
E
染色一样可显示肾小球内的细胞增生和浸润,
因其
可很好的显示基底膜,
可依细胞的位置区分内皮细胞、
系膜细胞和上
皮细胞。尚可观察基底膜是否增厚、皱缩和毛细血管塌陷。可观察肾<
/p>
小囊和肾小管基底膜是否增厚。
尚可观察肾小球硬化、
系膜基质增生、
系膜溶解。
PAS
阳性的蛋白滴可见于蛋白尿患者的肾小球和肾小管
上皮细胞浆内。
可显示细动脉硬化时的玻璃样变。
细胞性排异反应的
肾小管炎在
PAS
染色中也可很好显示。
注意:第四步染色时间过长容易,颜色过深不容易分辨,所以一定要
把握时间!
!
!
PAs
M
染色(六胺银套马松三色混合染色)
1
脱蜡
至水
→
流水冲洗
2
1%
过碘酸溶液
10min
→
流水冲洗
3
六胺银溶液
65
度
1h
→
镜观
(注:
如果六胺银溶液染色过深就要
用氯化金分化)
4
3%
硫代硫酸钠定影
→
水洗
5
苏木精染核
20min
左右
→
流水冲洗
6
盐酸酒精分化
10
—
15s
→
< br>流水冲洗
7
弱氨水返蓝
10
—
15s
→
流水冲洗
8
Masson
染色:
?
Masson
溶液染色
1min
左右
→
1%
冰醋酸洗
→
镜观<
/p>
?
亮绿橘
黄剂溶液染色
10S
左右
→
1%
冰醋酸洗
9
高浓度系列酒精脱水
10
二甲苯
I
、
II
分别透明
10min
左右
11
树胶封固
结果:基底膜、网状纤维和
IV
型胶原呈黑色,细胞核呈蓝黑色,背
景呈粉红色,免疫复合物呈红色,
III
型胶原呈蓝色或者绿
色。
由于基
底膜可清楚而精确显示,
所以免疫复合物定位精确,
而
对于肾小球内增生的胶原成分可区分
III
型<
/p>
(蓝色或者绿色)
和
IV
型
(黑色)
Masson
染色
Masson's trichrome stains
1
脱蜡至水
→
流水冲洗
2
媒染
剂染
30min
(
媒染剂配方:
10%
重铬酸钾
+10%
三氯醋酸。
二
者等量混合,有色融
入无色里)
→
流水冲洗
3
苏木
精染核
20min
左右
→
流水冲洗
4
盐酸酒精分化
10
< br>—
15s
→
流水冲洗
5
弱氨水返蓝
10
—
15s<
/p>
→
流水冲洗
6
Masson
染色:
?
Mas
son
溶液染色
1min
左右
→
1%
冰醋酸洗
→
p>
镜观
p>
?
亮绿橘黄剂溶液染色
10S
左右
→
1%
冰醋酸洗
7
高浓度系列酒精脱水
8
二甲
苯
I
、
II
分
别透明
10min
左右
9
树胶封固
结果:细胞核呈红色,免疫
复合物呈红色,基底膜、胶原纤维呈蓝或
者绿色(染色液
III
中若为甲苯胺蓝则显蓝色,若为亮绿则显绿色)
该方法优点是显示各部位的免疫复
合物,
呈红色或者嗜复红蛋
白。
可区分
肾间质水肿和肾间质纤维化
(
III
型
胶原)
,
前者呈淡蓝色,
后者显深蓝色
并可见蓝色胶原纤维。
直接免疫荧光
1
冰冻
切片(
3um
)
2
风扇
吹干
2h
→
4
度冷藏过夜
→
风扇吹干
1h
左右
(或者
4
度冷藏
p>
过夜
→
风扇吹干
2
h
)
3
加稀释抗体
[Antibody
:
PBS
液
(A=1
:
30
、
M=1
p>
:
90
、
C
3
=1
:
80
、
C
4
=1
:
30
、
C
1
q=1
:
60
、
F=1:10
、
G=1
:
80)]
4
37
度孵浴
1h
左右
5
生理盐水
I
、
II
各洗片
5min
6
甘油稀释液封片
7
4
度冷储
结果:异硫氰荧光素显绿色,罗丹明显红色
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