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切片用
HE
染色，
在病
变严重处采用
Paller
法对肾小管损伤程度评分：
即每高倍镜视野
（
PH
）
随机选择
(10)
个有病变的肾小管
，按
(100)
个肾小管记分，标准：肾小管明显扩张、细胞扁
平
为
( 1)
分；刷状缘损伤
(1)
分，脱落为
(2)
分；管型
(2)
分，肾小管管腔内有
脱落的、坏死的细
胞（未成管型或细胞碎片）计
(1)
分。
参考：董文斌，冉隆瑞，冯志强
，等
.
白细胞参与新生鼠窒息后肾损伤的作用及机制研究
[J
］
.
中国危重病
急救医学
,2000
，
12(4):2
08-210
1
．取材组织块，经
固定后，常规石蜡包埋，
4
μ
m
切片。
2
．
切片常规用二甲苯脱蜡，
经各级乙醇至水洗：
二甲苯
（
I
）
5min
→二甲苯
（Ⅱ）
5min
→
100
％
乙醇<
/p>
2min
→
95
％的乙醇
1min
→
80
％乙醇
1min
→
75
％乙醇
1min
→蒸馏水洗
2min
。
3
．苏木素染色
5min
，自来水冲洗。
4
．盐酸乙醇分化
30s
（提插数下）
。
5
．自来水浸泡
15min
或温水
（约
50
℃）
5min
。
6
．置伊红液
2min
。
7
．常规脱水，透明，封片：
95
％乙醇（
I
）
min
→
95
％乙醇（Ⅱ）
1min
< br>→
100
％乙醇（
I
）
1min
→
100
％乙醇
（Ⅱ）
1min
→二甲苯石碳酸
（
3
：
1
）
1min
→二甲苯<
/p>
（
I
）
1min
→二甲苯
（Ⅱ）
1min
→中性树脂封固。
各个
实验室，
HE
染色通常会有些差异，主任已经回复的很详细了。
我下面介绍一下，我们
的流程以及染色过程中的一些注意事项：
一取材和固定
取材后经固定
24
小时（
4%PA
灌
注取材的后固定
6~8
小时）以后，流水冲洗
< br>24
小时，置于
70%~80%
乙醇中，可长期保存。
二脱水和包埋
1
、
95%ALC
（二道）Ⅰ
2~4h
Ⅱ
2h
2
、无水
ALC
（二道）Ⅰ
1.5h
Ⅱ
1h
3
、二甲苯
+
无水乙醇（
1
：
1
）
20min
4
、二甲苯（二道）Ⅰ
10min
（注：脱水透明
esp.
透明时间可适当延长）Ⅱ
10min
5
、浸软蜡（
50~52
℃）
（二道）Ⅰ
30min
Ⅱ
1h
6
、浸硬蜡（
< br>58~60
℃）
（二道）Ⅰ
30min
Ⅱ
30min
7
、包埋：注意温度、切面。
三切片
修、切、展、贴、烤（烤片<
/p>
55~60
℃）
3~10h
四
HE
染色
1
、二甲苯脱蜡五道，每道
5~10
分钟
2
、无水乙醇Ⅰ
5min
Ⅱ
5min
3
、
95%
乙醇Ⅰ
5min
Ⅱ
5mn
4
、
80%
乙醇
5min
5
、
< br>70%
乙醇
5min
6
、
D
．
W
．
3~5min <
/p>
7
、
Harris
苏木素液
5min
（冬天可适当延
长，
eg.20min
）
8
、水洗
9
、
0.5%
盐酸酒精分色
3~10seconds
，镜下观察
10
、水洗蓝化
15~30min
（注意换水）
11
、
70%
乙醇
5min
12
、
80%
乙醇
5min
13
、伊红液（
95%
乙醇溶液）
3~30seconds
14
、
95%
乙醇Ⅰ
1min
Ⅱ
5min
15
、无水乙醇Ⅰ
5min
Ⅱ
5min
16
、二甲苯
+
乙醇（
1
：
1
）
5min
17
、二甲苯Ⅰ
5min
Ⅱ
5min
Ⅲ
5min
18
、中性树胶封片。
HE
染色注意事项：
1.
染色时调节
< br>pH
值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞
核着色。因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理
10-30min
，这
样可以使细胞核着色较深。染伊红时
胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加
1-2
滴冰醋酸。
2.
切片染苏木
精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚
（晰）
而细胞质基本无色为佳。
如果过分延长分色时间将导致染色太浅，
应重新染色后再行
分色。
3.
切片经酒精脱水后，入二甲苯
时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退
回无水酒精，更换酒精、二甲苯
，以求彻底脱水与透明。
4.
<
/p>
在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。
< br>
5.
切片从二甲苯取出或
进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。
6.
最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组
织块的面积，如漏出一部
分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡
。
苏木精—伊红染色法简称
HE
染色法，它是最常用的普通染色方法。苏木精（
hematoxyl
in
）
是阳离子染料，将细胞核内的嗜碱性物质染成蓝紫色。伊
红（
eosin
）是阴离子染料，将细
胞质和胶原纤维等染成粉红色。
常规
HE
染色步骤
(2009-12-06
13:52:46)
转载▼
标签：
he
染色乙醇二甲苯苏木精蒸馏水杂谈
（
1
）二甲苯（Ⅰ）
< br>
5-10 min
(2)
二甲苯（Ⅱ）
5-10 min
(3)
95%
乙醇（Ⅰ）
1-3 min
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