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细胞
HE
染色法实验
一、原理
苏木素
(Hematoxylin)-
伊红
(Eosin)
染色法，简称
HE
染色法。
HE
染色法采用两种染料即碱性染料苏木素和酸性染料伊红分别于细胞核和细胞质发生作用，
使细胞的微细结构通过颜色而改变它的折光率，
从而在光镜下能清晰地呈现出细胞图像
。
该
染色过程既有化学反应，
又有物理
作用参与。
从化学反应看，
组织细胞内含有酸性物质和碱
性物质，
细胞的酸性物质与碱性染料的阳离子结合，
< br>而细胞核的碱性物质与酸性染料的阴离
子结合，
使其中酸
性细胞核被碱性的苏木素染成蓝色，
而碱性的胞浆被酸性染料伊红染成红
色。其结果胞核呈蓝色，胞浆呈红色。从物理现象看，主要有吸附、吸收之说。
HE
染色提
供良好的核浆对比染色，是细胞化学染色最常用的一
种方法
二、实验用品
固定液：常用
95%
乙醇和冰丙酮
< br>
苏木精染液：
称取苏木精粉
0
.5g
，
铵矾
24g
< br>溶解于
70ml
蒸馏水中，
然后
取
NaIO 31g
，
水
5ml
，
再加入甘油
30m
l
和冰醋酸
2ml
，混合均匀，滤纸过
滤，备用。
伊红染液：称取
0.5g
水溶性伊红染液，溶于
100ml
蒸馏
水中。
稀盐酸乙醇溶液：用
75%<
/p>
乙醇配制
1%
盐酸。
系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。
培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。
三、实验步骤
样品制备：
对于贴壁生长细胞，
胰酶消化，
调整细胞浓度约<
/p>
1
×
105/ml
，滴加于盖玻片上
(
置
于
6
孔板中
)
，培养相应时
间后，取出细胞爬片，用
PBS
洗涤
3
次。
样品固定：
95%
乙醇固定
20min
，
PBS
洗涤
2
次，每次
1min
< br>。
染核：苏木素染液染色
2-
3min
，自来水洗涤。
分色：镜下
观察，若细胞核染色过深，用
1%
盐酸酒精溶液分色数秒，自来
水洗涤。
染胞质：浸入伊红染液染色
1min
，自来水洗涤。
吹干或自然晾干细胞爬片后，中性树胶封片。
若细胞用
4%
多聚甲醛固定，
则染色时间相应延长，
苏木素染色
12-15min
，
伊红
5min
即可。<
/p>
细胞转染
48h
后，
制备单细胞悬液，
细胞爬片，
完
全培养基培养
6
小时待细胞贴壁后，
更
换
无血清培养基继续培养
4-12h
，
然后进行
HE
染色。
HE
染色步骤：
1.
取出细胞爬片，用
PBS
洗涤
3
次。
2.
样品固定：
95%
乙醇固定
20min
，
PB
S
洗涤
2
次，每次
1min
。
3.
染核：苏木素染液染色
1
min
，自来水洗涤
3
min
，温水返蓝
5
min
。
4.
染胞质：浸入伊红染液染色
1min
，自来水洗涤
3 min
。
吹干或自然晾干细胞爬片后，中性树胶封片。
正常培养的细胞自噬活性很低，
不适于观察，
因此，<
/p>
必须对自噬进行人工干预和调节，经报
道的工具药有：
一、自噬诱导剂
(1) Bredeldin A / Thapsigargin /
Tunicamycin
：模拟内质网应激
(2)
Carbamazepine/
L-690
，
330/
Lithium
Chloride
（
氯化锂）
：
IMPase
抑制剂（即
Inositol
mon
ophosphatase
，肌醇单磷酸酶）
(3)
Earle's
平衡盐溶液：制造饥饿