-
小
RNA(Small
RNA)
可以分为下列三类
:
1
p>
、微
RNA
即
Mi
croRNA
(
miRNA
)
它是一类内生的、
长度约
20-24
个核苷酸的小
RNA
,
是发夹结构的约
70-90
个碱基大
小的单链
RNA
前体经过
Dicer
酶加工后生成。其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个
miRNA
可以有多个靶基因,而几个
miR
NAs
也可以调节同一个基因。
<
/p>
2
、小干扰
RNA
即
small interfering RNA
(siRNA)
有时称为短干扰
< br>RNA
(
short
interfering
RNA
)或
沉默
RNA
(
silencing <
/p>
RNA
),
是一个长
20
到
25
个核苷酸的双股
RNA
siRNA
主要参与
RNA
干扰(
RNAi
)现象
,以带有专一性的方式调节基因的表达
3
、与
piwi
相互作用的
RNA
即
Piwi-
interacting RNA (piRNA)
p>
它是一类小型
RNA
分子,长度大约是
p>
29
到
30
个核苷
酸。
piRNA
主要存在于哺乳动
物的
生殖细胞和干细胞中,通过与
Piwi
亚家族蛋白结合形成
p>
piRNA
复合物(
piRC
)来调
控基因沉默途径。
作用可以下列三方面:
A
、调节翻译和
mRNA
的稳定性
< br>
B
、维持生殖系和干细胞功能
C
、沉默转录基因过程
4
、较长的非编码
< br>RNA
较长的非编码
RNA
大
小约为几十到上千个核苷酸,
它们广泛地参与不同的细胞生化过程。
它包括已发现的
核内小
RNA
、对
snRNA
或
rRNA
具有修饰作用的核仁小
RNA
、参与蛋白质合成和运输
的
胞质小
RNA
、参与
RNA
剪辑的催化性小
RNA
及其他类型的非编码
RNA
(
tmRN
A
、端粒
酶
RNA
、反义
RNA
)。
一、微
RNA
又可以分为:
1.
pre-miRNA
是最早采用的
microRNA
约
70b
p
含
microRNA
茎环结构的
p>
pre-miRNA
miRNA
基因在细胞核内转录成前体转录本
(
pri-miRNA
)
,
并被加工成前体
pre-miRNA,
然后转运到细胞质被
加工成成熟的
miRNA
。
制备方式:化学合成、生物转录合成、
pre-
miRNA
质粒表达载体、
pre-
miRNA
病毒。
2. pri
-
miRNA
a
、天然
pri
-
miRNA
克隆自天然文库的
microRNA
由于保留了每个
microRNA
独自的原始天然双臂结构,效
果更好,是近来被首选方法。
从染色体基因文库中调取
300bp
-
1000bp
完整的
microRNA
基因,克隆到质粒载体
(普通载体或病毒载体),以强大的
CMV
启动子操纵该
300bp
-
p>
1000bp microRNA
。
b
、人工
pri
-
miRNA
效果较
pre-
miRNA
好,
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