MicroRNA-223、白介素27对巨噬细胞抗病毒天然免疫应答调控机制的研究

因此

,

我们想通过探求在病毒感染过程中胞内表达改变的

m iRNA

并进一步研

究其作用机制

,< /p>

为抗病毒感染提供新的潜在靶点。我们先期通过查阅文献筛选出

了 一些在髓系细胞中高表达的

miRNAs(

包括

miR-21,

miR-25,

miR-34a,

miR-106a,

miR-125b, miR-146a

和

miR-223),

并通过荧光定量

PCR (Q-PCR)

检测了这些

m iRNAs

在

RNA

病毒

VSV

感染小鼠腹腔巨噬细胞的过程中表达水平的变化

,

发现

miR-223

的表达显著上 调。

进一步研究发现

,VSV

并不是通过自身

RNA

和蛋白的合成来诱导< /p>

miR-223

的

上调

< br>,

而是通过诱导

I

型干扰素的产 生来促进

miR-223

的上调的

,< /p>

如果阻断

I

型干

扰素下游信号通路后再用

VSV

刺激

, miR-223

的表达将不再上调。

之后

,

我们将合

成的

siRNA

转染到小鼠巨噬细胞中

,

来模拟内源性

miR-223

的功能或特异性抑制

其作用来进 一步研究

miR-223

的功能

,

并通过

Q-PCR

、噬菌斑定量实验、

TCID50

定量实验、流式细胞术等方法检测了

< br>miR-223

对

RNA

病毒感 染的影响。

结果发现

,

在小鼠巨噬细胞中过表达

miR-223

能够上调< /p>

I

型干扰素

,

抵 抗

RNA

病毒的感染；抑制

miR-2 23

后会下调

I

型干扰素

,

促进

RNA

病毒的感染。 在分子

机制研究中

,

我们检测了过表达

miR-223

对

RNA

病毒活化的下游信号通路关键分

子的影响

,

发现过表达

miR-223

并没有明显增强

p38

、

ERK

、

JNK

和

I

κ

B

α

的磷酸

化

,

并且对

RIG-I

< br>的表达、

IRF3

的磷酸化以及

PKR

的磷酸化也没有显著影响

,

但< /p>

是能够促进

IRF7

的表达。

相反

,

如果抑制

miR-223,IRF7

的表达也相应地降低了。文献报道

,FOXO3

能

够抑制

IRF7

的转录活性

,

所以我们推测< /p>

miR-223

可能是通过靶向抑制转录因子

forkhead

box

O3

(FOXO3)

来促进

miR-223

的表达的

,

通过

miRNA