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MicroRNA-223
、白介素
27
对巨噬细胞抗病毒天然免疫应答调控
机制的研究
第一部分
MicroRNA-223
对巨噬细胞抗病毒天然免疫应答调控的机制研究天
然免疫是机体抵抗病毒入侵的第一道
有效防线
,
当机体受到病毒感染时
,<
/p>
免疫细
胞将通过模式识别受体识别病毒成分并活化下游的信号通路
,
从而表达Ⅰ型干扰
素和促炎症细胞因
子。
其中Ⅰ型干扰素在激发抗病毒免疫应答中发挥至关重要的
作
用
,
并且其表达受到机体的精确调控。
MicroRNA (miRNA)
是近年来发现的一类高度保
守的长度约为
21
～
23
个碱基
的非编码寡聚核苷酸
,
其功能主要是通过与
mRNA
的
3<
/p>
’非编码区
(3
’
UTR)
特异靶
位点相互作用从而负向调控
< br>mRNA
的翻译。
miRNA
参
与调控了多种生物学过程
,
包
括生长、
发育、分化、肿瘤的发生和发展等。
此外
,miRNA
在调控天然免疫应答中发挥关键作用
,
病毒在
miRNA
层面与机体
的相互作用和机制目前受广泛关注。
已有多篇关于
mi
RNA
参与调控抗病毒天然免
疫应答的相关报道
,
如
miRNA-146a
和
miRNA-155
分别在抗病毒天然免疫应答中起
着负向和正向的调控作用。
因此
,
我们想通过探求在病毒感染过程中胞内表达改变的
m
iRNA
并进一步研
究其作用机制
,<
/p>
为抗病毒感染提供新的潜在靶点。我们先期通过查阅文献筛选出
了
一些在髓系细胞中高表达的
miRNAs(
包括
miR-21,
miR-25,
miR-34a,
miR-106a,
miR-125b, miR-146a
和
miR-223),
并通过荧光定量
PCR (Q-PCR)
检测了这些
m
iRNAs
在
RNA
病毒
VSV
感染小鼠腹腔巨噬细胞的过程中表达水平的变化
,
发现
miR-223
的表达显著上
调。
进一步研究发现
,VSV
并不是通过自身
RNA
和蛋白的合成来诱导<
/p>
miR-223
的
上调
< br>,
而是通过诱导
I
型干扰素的产
生来促进
miR-223
的上调的
,<
/p>
如果阻断
I
型干
扰素下游信号通路后再用
VSV
刺激
,
miR-223
的表达将不再上调。
之后
,
我们将合
成的
siRNA
转染到小鼠巨噬细胞中
,
来模拟内源性
miR-223
的功能或特异性抑制
其作用来进
一步研究
miR-223
的功能
,
并通过
Q-PCR
、噬菌斑定量实验、
TCID50
定量实验、流式细胞术等方法检测了
< br>miR-223
对
RNA
病毒感
染的影响。
结果发现
,
在小鼠巨噬细胞中过表达
miR-223
能够上调<
/p>
I
型干扰素
,
抵
抗
RNA
病毒的感染；抑制
miR-2
23
后会下调
I
型干扰素
,
促进
RNA
病毒的感染。
在分子
机制研究中
,
我们检测了过表达
miR-223
对
RNA
病毒活化的下游信号通路关键分
子的影响
,
发现过表达
miR-223
并没有明显增强
p38
、
ERK
、
JNK
和
I
κ
B
α
的磷酸
化
,
并且对
RIG-I
< br>的表达、
IRF3
的磷酸化以及
PKR
的磷酸化也没有显著影响
,
但<
/p>
是能够促进
IRF7
的表达。
相反
,
如果抑制
miR-223,IRF7
的表达也相应地降低了。文献报道
,FOXO3
能
够抑制
IRF7
的转录活性
,
所以我们推测<
/p>
miR-223
可能是通过靶向抑制转录因子
forkhead
box
O3
(FOXO3)
来促进
miR-223
的表达的
,
通过
miRNA
靶点预测网站分
析和荧光素酶报告基因实验验证
,
发现
FOXO3
确实是
miR-223
的一个新的靶点。
最后
,
我们分别通过干扰和过表达
FOXO3
进一步验证了
miR-223
< br>确实是通过
靶向抑制
FOXO3,
增强
IRF7
的转录活性
,
从而上调
I
型干扰素发挥抗病毒作用。
综上所述
,RNA
病毒感染能够在小鼠巨噬细胞
中通过促进
I
型干扰素的产生诱导
mi
R-223
表达的上调
,
诱导上调的<
/p>
miR-223
又可以通过靶向抑制
FO
XO3
的表达
,
增
强
IRF7
的转录活性
,
从而上调
I
型干扰素的产生来发挥抗病毒作用。
该研究结果为巨噬细胞抗病毒天然免疫应答的调控机制增添了
新的认识
,
并
可能为抗病毒免疫治疗提
供新的思路。
第二部分
白细胞介素<
/p>
27
对巨噬细胞抗病