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目录
Next-generation
transcriptome assembly
应用第二代测序技术的转录组组装
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第一部分:总体介绍挑战与机遇
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第
二部分:实验提取与数据分析
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.... 2
组装前:
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组装策略:
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................................ 3
选择策略
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.......................... 4
选择组装软件
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............... 4
评价组装的质量
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.. 5
总结和未来的展望
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.................................... 5
全文完
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Next-generation
transcriptome
assembly
应用第二代测
序技术的转录组组装
第一部分:总体介绍挑战与机遇
1.
现有的转录组组装技术主要有三
大方向:基于参考序列的组装,从头组装,两
者结合的组装方法
2.
第二代测序与
< br>Sanger
测序在转录组中的优势:高灵敏度,高精度,高深度,检
测范围广甚至包括起调节作用的稀有转录本,
3.
第二代测序与其他高通量技术如
基因芯片技术相比在转录本中的优势:能达到
单碱基水平的分辨率,能反应表达水平的动
态变化,能进行从头基因注释
4.
第二代测序在组装中的挑战:测序片段
(reads)
短,质量值偏低,数据量大,要
求大内存或者多核计算机。现在已经有一
些软件能解决这些问题如:
Velvet
,
ABYSS
,
ALLPATH
等<
/p>
5.
转录本
组装与基因组组装的差别:
1.
测序深度问题:
各个转录本的深度不一致
2.
链特异性,组装软件需要考虑正义链和反义链之间的
overlap
3.
转录本变异:例
如可变剪切
第二部分:实验提取与数据分析
组装前
:
1.
文库构建:
A.
为了多的构建转录本,核糖体
RNA (rRNA)
和丰度过高的转
录本应该被移除,
但是如果实验
要研究转录本的丰度数值的话,
应该构建不
经过移除处理的文库
。
B.
是否取消文库构建的
PCR
过程,因为
PCR
导致高
GC
含量的转录本测序深度偏低。需要研发免扩增的
技术
(Amplification-free
protoc
ols)
,
最新的单分子测序技术则不需要
PCR
扩增
,
尤其是
Helicos
甚至不
需要构建
cDNA
文库,
但是这种测序技术会大幅增加错误率。
p>
应用免扩增的技
术使得转录本的测序深度更平均,更连续,有利于组
装。
C.
利用链特异性
的
RNA
测序技术则可以利用互补链的转录本信息来辅助组装。这在基因密度
较大的基因组如细菌,
古细菌和低等真核生物中尤为重要。
p>
此外在检测高等
生物的
antisense
transcription
中也有应用。
/bbs/topi
c/20719610
/wiki/Antisense_RNA
需要看参考文献
27
:什么是链特异的
RNA
测序
2.
测序:
A.
测序平台的选择:
454 SOLiD Solexa B.
测序片段长度:越长越好