-
1
、分子生物学检验技术：是以核酸或蛋白质
为分析材料，
通过分析基因的结构、表达的变化和由此而导致的基因功能
的改变，为疾病的研究和诊断提供更准确、更科学的信息和
依据的一门学科。<
/p>
2
、请说明分子生物学检验技术在临床
试验诊断中的应用。
（
1
）感染性微生物的检测。如：用
PCR
技术进行甲
型肝炎
病毒的检测、乙型肝炎病毒的检测和解脲脲原体的检测等。
（
2
）基因突变的检测。如：用<
/p>
PCR
一限制性片段长度多态
性（
RFLP)
技术检测地中海贫血基因突变。
（
3
）法医学检测。如：用
PCR
微卫星检测技术进行亲子关
系的鉴定和个体
识别。
（
4
）基因异常表达的检测。如：用
cDNA
表达的芯片技术进
行基因异常表达的检测。
（
5
）基因定位。如：用原位杂交技术进行组织与细胞中基
因表达的定位。
3
、基因组：是
一个细胞或一种生物体的整套遗传物质。
4
< br>、基因：是基因组中一个功能单位，是贮存有功能的蛋白
质多肽链信息或
RNA
序列信息及表达这些信息所必需的全
部核
苷酸序列。
5
、原核生物：是细菌、
支原体、衣原体、立克次体、螺旋
体、放线菌和蓝绿藻等原始生物的总称，是最简单的细
胞生
物体。
6
、操纵子结构：是原核生物基因组
的功能单位。
7
、质粒：是指细菌细
胞染色体外，能独立复制并稳定遗传
的共价闭合环状分子。
<
/p>
8
、转座因子：又称为转座元件，是一类在细菌染色体、质
粒和噬菌体之间自行移动并具有转位特性的独立的
DNA
序
列。
9
、原核生物基因组的结构特征：
<
/p>
（
1
）原核生物基因组通常仅由一个
DNA
分子构成，基因组
中只有一个复制起
点，具有类核结构。
（
2
）具有操纵子结构，模板
mRNA
为多顺反子
mRNA
。编
码区远远大于真核生物基因组
，但又远远小于病毒基因组。
在基因组中存在多功能的识别区域，如复制起始区、转录启
动区和终止区等，这些区域常常含有反向重复序列。
（
3
）结构基因通常为单拷贝基因，编码顺序一
般不重叠。
（
4
）具有编码同工酶的基因。
（
5
)
含有可移动的
DNA
序列。
10
、病毒基因组的结构特点：
（
1
）与细菌和真核生物基因组相比，病毒
基因组结构简单，
基因数少，所含信息量也少。
（
2
）病毒基因组的核酸类型较多，有双链
DNA
、单链
DNA
、
双链
RNA
和单链
RNA
；有环状分子，也有线性分子。但无论
是哪种核酸类
型，一种病毒颗粒中核酸成分只能为一种，或
DNA
，或
RNA
。
（
3
）基因组中有
基因重叠现象，这种结构的意义在于使较
小的基因组能携带较多的遗传信息。
（
4
）基因组中具有操
纵子结构。
（
5
）病毒基因可连续也可间断。
（
6
）基因组中重复序列少。
（
7
）基因组中非编码区少。
（
8
）病毒基因组是单倍体。
（
9
）病毒基因组核酸序列中功能相关
的蛋白质基因往往丛
集在基因组的一个或几个特定部位，形成一个功能单位或转
录单元。
（
10
）病毒基因组含有不规则的结构基因。
11
、真核生物基因组的结构特点：
（
1)
真核生物基本上不存在操纵子结
构，一个结构基因转录
生成一条
mRNA
，即
mRNA
是单顺反子，许多蛋白是由相同
或不同的亚基构成，因此涉及多个基因的协调表达。
（
2
）基因组中非编码的区域多于编码区域，并且，编码蛋
白质的基因一般是不连续的断裂基因，即有外显子和内含
子，在转录
后经剪切成成熟
mRNA
后，才能翻译成蛋白质。
（
3
）基因组
DNA
有重度、中度和低度三种重复序列。（
4<
/p>
）
基因组
DNA
具有多基因家族与假基因。
（
5
）基因组
DNA
结构存在不同程度的差异，
即基因多态性。
（
6
）基因组
DNA
也有基因重叠现象。
（
7
）真核细胞的染色体末端存在一种由
DNA
片段和蛋白质
组成的独特结构，即端粒。它能维持染色体的稳定性。
12
、乙型肝炎病毒（
HBV
）基因组的结构：
HBV
基因组
的长
度为
3.2kb
，是带有部分单链
区的环状双链
DNA
分子，是目
前已知
感染人类最小的
DNA
病毒。
HBV<
/p>
的两条链长度不等，
长的链为负链，用“L（
-
）”表示，其长度是固定的，携带有
病毒全部的编码信息
；短的为正链，用“S(+)”表示，正链在
不同的分子中长度不等，一般长约
1.6-2.8kb,
大约是负链的
50%-1
00%
，并且短链的5’端位置是固定的，而3’端的位置
是可
变的。在负链的5’端有一低分子量的蛋白质，在正链的
末端则有一段短
RNA
，
它们是引导
DNA<
/p>
合成的引物。
两条链
的5’端有约
250-300bp
可互补结合，所以也称为黏性末端，
这种互补结合是
DNA
保持双链环状的基础。此外，
这部分核
苷酸序列也是
HBV
最常整合
到肝细胞染色体
DNA
中得序列。
在黏
性末端的两侧还各有
11
个核苷酸构成的顺向重复序列，
分别称为
DR1
和
D
R2
，
DR1
在负链5’端，
DR2
在正链5’端，
中间相隔
223
个核苷酸。
DR
区域是
DNA
成环及病毒复制的关
键区域。<
/p>
HBV
基因组已经确定在负链
DNA
核苷酸序列为模板
转录的
RNA
上含有
4
个公认的开放阅读框，分别成为
S
、
C
、
P
、
X
区。
13
、丙型肝炎病毒基因组（
HCV)
的结构：呈球形颗粒，直
径约
50nm
，有一脂质包膜。基因组
为单链正链
RNA
病毒，
链长约
9.5kb,
整个基因组只有一个
ORF
，编码
3011
或
3010
个氨基酸。5’端和3’端分别有短的非编码区（
UT
R)
。5’端
UTR
由
324-341
个核苷酸组成，可能在病毒的复制和翻译过
< br>程中起重要的调节作用。5’端
UTR
的核苷酸序列保守
性强，
可用于基因检测诊断。
3’端
U
TR
由
27-55
个核苷酸组成，
其长
度取决于病毒的来源，由病毒固有顺序与各种长度的“多
U
序
列”组成，是
H
CV
的独特结构。
HCV
基因产物均来
自一个大
的多蛋白前体，经宿主与病毒编码的蛋白酶的联合作用，在
翻译中或翻译后被加工成为结构蛋白及非结构蛋白。结构蛋
白包括两种：
核心蛋白和包膜糖蛋白。
非结构蛋白包括四种：
N
S2
、
NS3
、
NS4
、
NS5
。
< br>
14
、人类免疫缺陷病毒基因组（
HIV
）的结构：（主要有两
型：
HIV-1
和
HIV-2
。两型病毒的
核苷酸序列差异超过
40%
，
世界范围
的
AIDS
大多由
HIV-1
所致，
HIV-2
只在西非呈地区
性流行。）
HIV
基因组由
2
条相同的正链
RNA
在5’端通过氢
键
互相连接在一起形成二聚体，其单链
RNA
< br>含有
9749
个核苷
酸。
HIV
基因组共有
9
个基因，
其中
3
个是结构基因，
6
个是调
控基因。在病毒基因组的5’端和3
’端各有相同的一段核苷酸
序列，称为长末端重复序列（
LTR
)
。
LTR
中含有启动子、增
强
TATA
序列等，它们对病毒基因组转录的调
控起关键作用。
15
、质粒的一般性
质：质粒作为一个完整的复制子，在转化
< br>菌细胞后能自主复制，并对细菌的一些代谢活动和抗药性表
现具有一定的作用。在
质粒只有在宿主细胞内才能完成自我
复制，一旦离开宿主细胞就无法复制和扩增，相反，
宿主细
胞失去了质粒依旧能存活。质粒也是一种游离基因，既可整
合到细菌染色体中，又可在游离出来。质粒具有不相容性。
16
、基因结构异常：广义上是指染色体畸变和基因突变，狭
义
上一般是指基因突变。
17
、基因结
构异常的类型：通常分为单基因病和多基因病。
单基因病包括：三联体重复、血红蛋白病
、苯丙酮尿症和遗
传性原发痛风。多基因病包括：原发性高血压、糖尿病和实
体瘤。
18
、
端粒：
真核细胞染色体末端存在着一种由
DNA
片段和蛋
白质组成的独特结构，即为端粒。它对维持染色体的稳
定性
具有重要作用。
19
、端粒的主要作用：
（
1
）维持染色体的稳定性，防止染色体重组及末
端被降解。
（
2
）保证细胞在有丝分裂时染色体准确的分离，在减数分
裂是保证染色体的成对及运动
。
（
3
）端
粒在细胞生长中有很大的作用，其与肿瘤和衰老有
关。
20
、人类基因组：包括细胞核内的核基因组和细胞质内的线
粒体基因组。核基因组由
3.16
×
10
９
bp
组成，线粒体
基因组
由
16569bp
组成。
21
、核酸：是以核苷酸为基本组成单位的生物信息大分子。
（天然存在的核
酸有两类，即
DNA
和
RNA
。）
22
、核酸分离
纯化应遵循的原则：一是保证核酸一级结构的
完整性，因为完整的一级结构是核酸结构和
功能研究的基本
要求；
二是尽量排除其他分子的污染，
保证核酸样品的纯度。
23
< br>、简述核酸分离纯化技术路线的设计：
（
1
）核酸的释放：①细胞破碎方法中机械剪切法不能用于
基因组
DNA
的提取；
②非机械法
常用化学试剂或酶细胞溶解
法。
（<
/p>
2
）核酸的分离与纯化：①除去蛋白质、多糖、脂类等大
分子物质；
②除去非目的核酸组分；
③除去实验
溶液和试剂。
（
3
< br>）核酸的浓缩、沉淀于洗涤：①浓缩：提高样品浓度；
②沉淀：常用的浓缩方法，
如醋酸钠、醋酸铵等；③洗涤：
除去共沉淀的盐，常用
70%-
75%
的乙醇。
24
、
简述酚抽提法分离纯化基因组
DNA
的方法，
并绘制出流
程示意图：
（
1
）将分散好的真核生物组织、
细胞在含
EDTA
、
SDS
及无
DNA
酶裂解缓冲溶液裂解细胞，破坏细胞膜
、核膜，
EDTA
能抑制细胞中
DNA
酶的活性，
使
DNA
< br>分子完整地以可溶形式
存在于溶液中。
SDS
主要引起细胞膜的降解并能乳化脂质和
蛋白质，并使它们沉淀，同时还有降
解
DNA
酶的作用。再经
蛋白酶
K
处
理后，
用
PH8.0
的
Tris
饱和酚抽提
DNA
，
重复抽提
至一定纯度后，得到的
DNA
溶液经乙醇沉淀进一步纯化，此
法可获得
100-200kb
的
DNA
片段。
（
2
）书本
82
页
25
、简述低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法如何回收基因组
DNA
，有何优点：本方法是从低熔点琼脂糖凝胶中切出含待
回收的
DNA
凝胶块，利用其纯度高、熔点低及凝固温度低的
特点，
对
DNA
片段回收的方
法。
该法对高分子量的
DNA
特别
有用，也能有效的分离小分子量的
DNA
片
段。
26
、质粒
DNA
纯化的主要方法与原理：
（
1
）
cscl-EB
法：是一种沉降平衡离心法。经超速离心，离
心介质
c
scl
形成一连续的密度梯度，在过量
EB
存在的条件
下，各种不同密度的物质经离心平衡后得以分开。该法主要
用于纯化容易出现切口的极大质粒
DNA
和具有某些
特殊用
途的闭环质粒
DNA
。
（
2
）聚乙二醇沉淀
法：是一种分级沉淀法。质粒
DNA
的粗
制品首先用
LiCl
沉淀大分子
RN
A
，并用
RNase
消化小分子
RNA
，然后在高盐条件下，用
PEG
选择性地沉淀大的质粒
DNA
，沉淀的质粒<
/p>
DNA
进一步用酚
/
氯仿抽提和乙醇沉淀。
PEG
沉淀法简单、经济、试用广泛
，尤其对碱裂解法提取的
质粒纯化效果好，适用于分子克隆中所有常规的酶学反应，
也能用于高效的哺乳动物细胞学的转染。但不能有效分离带
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