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转录组

作者:高考题库网
来源:https://www.bjmy2z.cn/gaokao
2021-02-27 21:21
tags:

-

2021年2月27日发(作者:射线)


转录组测序问题集锦




转录组是某个物种或者特定细胞类型产生的所有转录本的集合,转录组测序


(RNA- seq)


是最近发展起来的利用深度测序技术进行转录分析的方法

,


可以对全


转录组进行系统的研究。



Roche GS FLX Titanium



Illumina Solexa GA IIx



AB SOLID 4


均可以对转录


组进行测序,



Roche GS FLX Titanium



Illumina Solexa GA IIx



AB SOLID 4


相比, 拥有更长的读长和较小的数据量,适用于表达量较高基因的


RNA


全长测


序。


但是对低表达丰度的基因,


可能需要多次测序才能得到足够的数据,


成本比


较高



,而


Illumina Solexa GA IIx



AB SOLID 4


数据读 取量大,能够得到较高


的覆盖率,


可以较好的降低成本。


若是位置基因组序列的物种,



Roche GS FLX


Titanium


测序更有优势,其较长的读长 便于拼接,获得更好的转录本数据。



转录组测序可以供研究者 在转录本结构研究


(基因边界鉴定、


可变剪切研究等)



转录本变异研究(如基因融合、编码区



SNP


研究),非编码区域功能研究



Non-coding RNA


研究、


mi RNA


前体研究等),基因表达水平研究以及全新转


录本发现等 方面进行深入研究。



研究转录组的方法有哪些?



答:


目前研究转录组的方法主要三种,


基于杂交技术的

< br>cDNA


芯片和寡聚核苷酸


芯片,


基于


sanger


测序法的


SAGE (serial analysis of gene expression)



LongSAGE



MPSS(massi vely parallel signature sequencing)


,基于第 二代测序技术的转录


组测序,又称为


RNA- Seq




转录组测序比其他研究方法有哪些优势


?

答:转录组测序具有以下优势:(


1


)可以直接测定每个转 录本片段序列、单核


苷酸分辨率的准确度,


同时不存在传统微阵 列杂交的荧光模拟信号带来的交叉反


应和背景噪音问题;(


2< /p>


)灵敏度高,可以检测细胞中少至几个拷贝的稀有转录


本;(


3


)可以对任意物种进行全基因组分析,无需预先设计特异性探针, 因此


无需了解物种基因信息,


能够直接对任何物种进行转录组分 析,


同时能够检测未


知基因,


发现新的 转录本,


并准确地识别可变剪切位点及


cSNP



UTR


区域。


< p>
4



检测范围广,


高于< /p>


6


个数量级的动态检测范围,


能够同时鉴 定和定量稀有转录本


和正常转录本。



转录组测序有什么样的样品要求?



答:(


1




样品纯度要求:



OD


值应在


1.8



2.2


之间;电泳检测


28S:18S


至少


大于


1.8





2


)样品浓度:



total RNA


浓度不低于


400 ng/μg




3



total RNA


样品请置 于


-20


℃保存;请提供


total RNA


样品具体浓度、体积、


制备时间、溶剂名称及物种来源。 请同时附上


QC


数据,包括电泳胶图、分光光

< br>度或


Nanodrop


仪器检测数据。

< br>



4


)样品请置于

< p>
1.5 ml


管中,管上注明样品名称、浓度以及制备时间,管口使



Parafilm


封口。

< br>建议使用干冰运输,


并且尽量选用较快的邮递方式,


以降 低运


输过程中样品降解的可能性。



mRNA


的纯化分离方法?



答:进行


mRNA


研究中,首先需要对样本进行 总


RNA


抽提,抽提得到的


RNA



含有


mRNA


外 ,


还含有


rRNA


< br>tRNA



为防止这两类


RNA


对转录组研究的影响,


因此我们需要对


mRNA


进行分离纯化。真核细胞的


mRNA

< br>分子最显著的结构特


征是具有


5’


端帽子结构(


m7G


)和


3’


端的


Poly(A)


尾巴。绝大多数哺乳类动 物细



mRNA


3’


端存在


20-30


个腺苷酸组 成的


Poly



A

)尾,通常用


Poly



A+



表示。


这种结构为真核

< br>mRNA


的提取,


提供了极为方便的选择性标志,


寡聚



dT



纤维素或寡聚



U



琼脂糖亲合层析分离纯化


mRNA


的理 论基础就在于此。



mRNA


的分离方 法较多,其中以寡聚(


dT



-


纤维素柱层析法最为有效,已成为常规方


法。此法利用


mRNA 3’


末端含有


Poly


A+


)的特点,在


RNA


流经寡聚(


dT


)纤


维素柱时,在高盐缓冲液的作用下,


mRNA


被特异地结合在柱 上,当逐渐降低盐


的浓度时或在低盐溶液和蒸馏水的情况下,


m RNA


被洗脱,经过两次寡聚(


dT



纤维柱后,即可得到较高纯度的


mRNA




使用


Solexa


进行转录组测序时,


样本


RNA

如何进行片段化处理?



cDNA


插入片


段长度的选择?



答:


Solexa


转录组测序文库构建时采用专用的打断

Buffer



RNA


样本进行片 段


化处理,


这种方法充分利用


RNA< /p>


对二价阳离子的敏感性,


具有稳定性好的优点,

< br>通过这种方法打断能得到更加均匀的覆盖率。


mRNA- seq


可以既可以采用单端测

-


-


-


-


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-


-



本文更新与2021-02-27 21:21,由作者提供,不代表本网站立场,转载请注明出处:https://www.bjmy2z.cn/gaokao/676064.html

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