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创作编号：
GB88783BT9125XW
创作者：
凤呜大王
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HAT
培养基筛选杂交瘤细胞的原理
HAT
培养基是指含有次黄嘌呤（
hy
poxantin
）
、氨基蝶呤（
am
inopterin
）
和胸腺嘧啶脱氧核苷（
< br>thymidin
）三种物质的细胞培养基。
1.
细胞内合成
DNA
原料的核苷酸形成的途径
（
1
）起始合成途径（
de novo
pathway
）
：
由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，
为
DNA<
/p>
分子的合成提供原
料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与
这一过程。
（
2
）中间合成途径（
salvage pa-
thway
）
：
利用次黄嘌呤
—
鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（
< br>HGPRT
）和胸腺嘧啶核苷激
酶（
TK
）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸。
2.
利用
HAT
培养基筛选杂交瘤细胞
（
1
）经融合后细胞将以多种形式出现：融合的脾细胞
—
< br>瘤细胞、融合
的脾细胞
—
脾细胞
、融合的瘤细胞
—
瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的
瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。
正常的脾细胞在培养基中存活仅
5
～
7
天，
无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去。而未融合的瘤细胞则需进
行特别的筛选去除。
（
2
）
融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的中间合成途径缺失株
（例
如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株）
，
即只有起始
合成途径。效应
< br>B
细胞虽不增殖，但有两条
DNA
合成途径。
（
3
< br>）氨基蝶呤是叶酸的拮抗剂，可阻碍起始合成途径。
HAT
培养基中
含有氨基蝶呤时，细胞只有中间合成途径，所以必须供给核苷酸。杂交瘤
细胞的起始合成途径被氨基喋呤阻断，但可通过中间合成途径利用以培养
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本文更新与2021-02-26 13:46，由作者提供，不代表本网站立场，转载请注明出处：https://www.bjmy2z.cn/gaokao/672364.html