-
大肠杆菌的检测：大肠菌群测定的操作细则
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、
产酸产气、
需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌
主要来于人
畜粪便
,
故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量
,
推断食品中有否污染
肠道致病菌的可能。<
/p>
食品中大肠菌群数系以
100mL(
g)
检样内大肠菌群最可能数
(MPN)
表示。
1
设备和材料
1.1
温箱：36±1℃。
1.2
冰箱<
/p>
:0
～
4
℃。<
/p>
1.3
恒温水浴
:44.5±0.5℃。
1.4
天平。
1.5
显微镜。
1.6
均质器或乳钵。
1.7
平皿
:
直径为
90mm
。
1.8
试管。
1.9
吸管。
1.10
广
口瓶或三角烧瓶
:
容量为
50
0mL
。
1.11
玻璃珠
:
直径约
5mm
。
1.12
载玻片。
1.13
酒精灯。
1.14
试管架。
2
培养基和试剂
2.1
乳糖胆盐发酵管
:
按
GB
4789.28
中
4.9
规定。
2.2
伊红美蓝琼脂平板
:
按
GB 4789.28
中
4.25
规定。
2.3
乳糖发酵管
:
按
GB 4789.28
中
4
.10
规定。
2.4 EC
肉汤
:
按
GB
4789.28
中
4.11
规定。
2.5
磷酸盐缓冲稀释液
:
按
GB 4789.28
中
3.22
规定。
2.6
生理盐水。
2.7
革兰氏染色液
:
按
GB 4789.28
中
2.2
规定。
3.1
检样稀释
3.1.1
以无菌操作将检样
25mL(
或
< br>g)
放于有
225mL
灭菌生理
盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶
内
(
瓶
内予置适当数量的玻璃珠
)
或灭菌乳钵内
,
经充分振摇或研磨做成
1:10
的
均匀稀释液。
固体检样最好用均质器
,
以
8 000-10 000 r/min
的速度处理
1min,
做成
1:10
的均匀稀释液。
3.1.2
用
1mL
灭菌吸管吸取
1:10
稀释液
1mL,
注入含有
9mL
灭菌生理盐水或其他稀释液的试
管内
< br>,
振摇试管混匀
,
做成
1:100
的稀释液。
3.1.3
另取
1mL
灭菌吸管
,
按上条操作依次做
10
倍递增稀释液
,
每递增稀释一次
,
换用
1
支<
/p>
1mL
灭菌吸管。
3.1.4
根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计<
/p>
,
选择三个稀释度
,
每个稀释度
,
接种
3
管。
3.2
乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖
胆盐发酵管内
,
接种量在
1mL
以上者
,
用双料乳糖胆盐发酵管
,
1mL
及
1mL
以下者
,
用单料乳糖胆盐发酵管。
每一稀释度接种
3
管
,
置
36±1℃
温箱内
,
培养
24±2h,
如所有乳糖胆盐发酵管都不
产气
,
则可报告为大肠菌群阴性
,
如有产气者
,
则按下列程序进
行。
3.3
分离培养
将产气的发酵管分别转种
在伊红美蓝琼脂平板上
,
置
36±1℃
温箱内
,
培
养
18-24h,
然后取
出
,
观察菌落形态
,
并做革
兰氏染色和证实试验。
3.4
证实试验
在上述平板上
,
挑取可疑大肠菌群菌落
1-2
< br>个进行革兰氏染色
,
同时接种乳糖发酵管
,
置
36±1℃温箱内培养
24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆
菌
,
即可报告为大肠菌群阳性。
3.5
报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数
,
查
MPN
检索表
,
报告每
100mL(g)
大肠菌群的
MPN
值。
4
粪大肠菌群
(faecal coliform)
4.1
用接种环将所有产气的乳糖
胆盐发酵管培养物
(
见
3.2
条
)
转种于
EC
肉汤管内
,
置
44.
5±0.2℃水浴箱内
(
水浴箱内的水面应高于
EC
肉汤液面
),
培养
24±2h,经培养后
,
如所有
EC
肉汤管均不产气
,
则可
报告为阴性
;
如有产气者
,
则将所有产气的
EC
肉汤管分别转种于伊
红美蓝琼脂平板上
,
置
培养
18-24h,
凡平板上有典型菌
落者
,
则证实为粪大肠菌群阳性。
4.2
结果报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数
,
查
MPN
检索表
,
报告每
100mL(g)
粪大肠菌群的
MPN
值
乳酸菌的检测：
一
概述
乳酸菌是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸
，
需氧和兼性厌氧，
多数无动力，
过<
/p>
氧化氢酶阴性，
革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。
这类细菌在自然界分布广泛，
可栖居在人
和各种动物的
口腔、肠道等器官内，在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌
的存在。<
/p>
乳酸菌在工业、
农业和医药等与人类生活密切相关的领域应用价值
很高，
相当多的
乳酸菌对人、畜的健康起着有益的作用，但个别
菌种能对人畜致病，乳酸菌主要包括
23
个
属的细菌。
二
样本采集
检样主要为含乳酸菌活菌的饮料和微生态制剂，样本应放入冰箱保存，心快检验。
三
检验方法（中华人民共和国国家标准
乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验
GB
／
< br>T 16347-1996
）
乳酸菌菌总数的测定：
乳酸菌菌落总数是指标样在一定条件下培养后，
< br>所得
1ml
检样中所含
乳酸菌菌
落的总数。
（一）检验程序
乳酸菌菌落总数检验程序如下：
（二）培养基和试剂
改良
TJA
培养基（改良番茄汁琼脂培
养基）；改良
MC
培养基（
modif
ied
Chalmers
培养基）；
0.1
％亚甲蓝牛乳培养基；
6.5
％
氯化钠肉汤参照；
pH9.6
葡萄糖肉汤；
40
％胆汁
肉汤；淀粉水解培养基；精氨酸水解培养基；乳
酸杆菌糖发酵管；七叶苷培养基；革兰氏染
色液；
3
％过氧化氢溶液；蛋白胨水、靛基质试剂；明胶培养基；硝酸盐培养基、硝酸盐试
< br>剂；生理盐水：定量分装于三角瓶和试管内灭菌。
（三）操作步骤
1
．以无菌操作将经过充分摇匀的检样
25ml
< br>（或
25g
）放入含有
225m
l
灭菌生理盐
水的来菌广口瓶内做成
1
：
10
的均匀稀释液。
2
．用
1
ml
灭菌吸管吸取
1
：
10
稀释液
1m
，沿管壁徐徐
注入含有
9ml
灭菌生理盐水
的试管内
（注意吸管尖端不要触及管内稀释液）。
3
．另取
1ml
灭菌吸管，按上述操作顺
序，作
10
倍增稀释液，如此每递增一次，即
< br>换用
1
支
1ml
灭菌吸管。
4
．选择
2
～
3
个以上适宜稀释度，分别在作
10
倍递增稀释的同时，即以
吸取该稀
释度的吸管移
1ml
稀释液于
灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
5<
/p>
．稀释液移入平皿后，应及时将冷至
50
℃的乳酸菌计数培养基（改良
TJA
或改良
MC
）注入平皿约
15ml
，并转
动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾入加有
1ml
稀
释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照，
以上整个
操作自培养物加入培养皿开
始至接种结束须在
20min
内完成。
6
．待琼脂凝固后，翻转平板，置
36
℃±1℃温箱内
培养
72h±3h
取出，观察乳酸
菌菌
特征，
选取菌落数在
30
～
300
之间的平板进行计数。
计算后，
随机挑取
5
个菌落数进行
革兰氏染色，显微镜检查并做过氧氢酶试验。
革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，无芽胞的球
菌
或杆菌可定为乳酸菌。
根据证实为
乳酸菌菌落计算出皿内的乳酸菌数，
然后乘其稀释倍数即
得每亳
升样品中乳酸菌数。
例如，
检样
10<
/p>
－
4
的稀释液在改良
TJA
琼脂平板上，
生成的可疑
菌
落为
35
个，取
5
个鉴定，证实的乳酸菌的
4
个，则
1ml
检样中乳酸菌数为：
35×4／5×104＝2.8×105
7
．乳酸菌在改良
T
JA
和改良
MC
培养基上菌落生长形态
特征。
（四）乳酸菌的鉴定
对上述分离到的乳酸菌需进行菌种鉴定时，则作以下试验。
1
．菌种制备
<
/p>
自平板上挑取菌落，接种于改良
TJA
或
改良
MC
琼脂斜面，于
36
℃
±1℃，
24
～
48h
培养，刮取菌苔，分别进行下列试验。
2
．
乳酸杆菌鉴定试验
极少见还原硝酸盐，
不液化明胶，
不产生靛基质和
硫化氢。
3
．常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应。
4
．产酸乳的链球菌的鉴别试验。
Detection of Escherichia coli:
Determination of coliform bacteria in the
operating rules
Coliform group refers to the group of
ferment lactose, acid gas, aerobic and
facultatively
anaerobic gram-negative
non-sporing bacteria mainly comes from human
and animal feces, therefore as the
faecal pollution indicators to evaluate the
hygienic
quality of food, food is not
infer pollution intestinal pathogens
may.
The number
of coliform bacteria in food by 100mL (g) samples
in coliforms most probable
number (MPN)
said.
1 the
equipment and materials
1.1: 36
±
1
℃
temperature box.1.2: 0 ~ 4
℃
refrigerator.1.3: 44.5
±
0.5
℃
constant
temperature water 1.4 1.5
microscope.1.6 homogenizer or mortar.1.7
Petri dish: diameter of 90mm.1.8 1.9
straw.1.10 jars or Erlenmeyer flask:
capacity of 500mL.1.11 glass beads:
diameter of about 5mm.1.12 slides.1.13 alcohol
1.14 test tube rack.
2 culture media and
reagents
2.1
bile salt lactose fermentation tube: according to
GB 4789.28 4.9 provisions.
Eosin methylene blue agar plate: 2.2 in
GB 4789.28. 4.25 provisions.
2.3 lactose fermentation
tube: according to GB 4789.28 4.10
provisions.
2.4
EC broth: according to GB 4789.28 4.11
provisions.
2.5
phosphate buffer solution at GB 4789.28: 3.22
set.
2.6
saline.
-
-
-
-
-
-
-
-
-
上一篇：采购意向书中英文
下一篇：个人求职简历(Resume)[中英文正式版]