293T细胞转染_201709271600291

细胞转染实验

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．实验目的

学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法

—

脂质体介导的转染。

< /p>

了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋

白），为染色准备实验材料。

Transfect

2

．实验原理

上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的

一般过程。

外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导

法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外 源质粒

进入；磷酸钙法和脂质体法 是利用不同的载体物质携带质粒通过直接

< br>穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；病毒法是利用包装了

外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电 击法和

磷酸钙法的实验条件控制较 严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、

而且可能对于细胞有较大影响；所以现在对于很多普通细胞系，一

般的瞬时转染 方法多采用脂质体法。

利用脂质体 转染法最重要的就是防止其毒性，因此脂质体与质粒的

比例，细胞密度以及转染的时间长 短和培养基中血清的含量都是影

响转染效率的重要问题，通过实验摸索的合适转染条件对 于效率的

提高有巨大的作用。

上图是本次实验采用的脂质体中阳离子组分的结构的示意图。

本次实验采用的脂质体是

promega

公司的

TransFast

脂质体试

剂，它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物，是对于本次实< /p>

验中采用的

293T

细胞优化的转染试剂。

3.

实验材料与器材

1

）材料

293T

细胞

MyoD

表达质粒和

EGFP

表达质粒

DMEM

培养基

链霉素

/

青 霉素（双抗）

FCS

（小牛血清）