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附件
5
：流感监测实验技术操作规范
一、
流感监测临床标
本的采集、
运送、
处理及流感病毒株的运输
（一）
、流感临床标本的采集
病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，
及其保存
运输等环节。
多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，
其次为气管和支气
管分泌物及尸检组织。
标本采集后
应立即放入适当的采样液中低温保
存。
采样液常用的采样液有以下五种：普通肉汤、
pH7.4
～<
/p>
7.6
的
Hank's
< br>、
Eagle's
、
水解乳蛋白
液或不加抗菌素的生理盐水
（漱喉液）
。
为防止采样液生长细菌和真菌，
在采样液中需加入抗菌素，
加
入庆大
霉素，其终浓度为
0.1mg/ml,
< br>和抗真菌药物，其终浓度为
2mg/ml
。加
入抗菌素以后重新调节
pH
值为
< br>7.4
，配制好以后，分装每个采样管
4ml,-20<
/p>
℃冻存。采样方法有以下几种：
1)
鼻拭子：将带有聚丙烯纤维头的
拭子轻轻插入鼻道内鼻腭
处，停留片刻后缓慢转动退出。以另一拭子拭另侧鼻孔。将拭子
头浸
入采样液中，尾部弃去。
2)
咽拭子：用带有聚丙烯纤维头的
拭子擦拭双侧咽扁桃体及
咽后壁，同样将拭子头浸入采样液中，尾部弃去。
注：
亦可将鼻、
咽拭子收
集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。
3)
鼻咽抽取物：
< br>用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。
先将收集器头部插入鼻腔，接通负压
，旋转收集器头部并缓慢退出。
收集抽取的粘液，并用采样液
5
ml
涮洗收集器
3
次。
4)
漱口液：用
10
ml
生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，
发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。
然后，用平皿或烧杯收集洗液
5)
鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将
5
ml
生理盐
水注入一侧鼻孔，
嘱患者同时发
K
音以关闭咽腔。
然后
让患者低头使
生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔。
（二）
、临床标本运送
新鲜的临床采集标本应在
4
℃条件下
24
小时内运送至全国流感
监测网络实验室。
未能
24
小时内送至实验室的，
应置
-70
℃或以下保
存。标
本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，
24
小<
/p>
时内能进行接种的可置于
4
℃保存，如未
能接种应置
-70
℃或以下保
存。
冻存的临床采集标本应在冻存的条件下，
低温送至实验室。
冻存
的标本送到实验室后，
< br>24
小时内能进行病毒分离的，
可以放置
4
℃保
存。如未能分离的标本应置
-70
℃或以下保存。
临床标本采集管建议使用带螺口的塑料管。
（三）
、临床标本处理
临床采集标本送至实验室后，须经处理后再进行病毒的分离接
种。
含聚丙烯纤维的拭子的采集标本，
先将含聚丙烯纤维的拭子在管
壁反复挤压后取出。鼻腔或咽部洗液的标本，充分振荡标本管，将粘
液打碎
。置
4
℃待其自然沉淀
5
～
10
分钟，取上清
5 <
/p>
ml
。上清液可直
接接种或低温保存。<
/p>
鼻咽漱液或抽取液：
用干净灭菌过的毛
细吸管，
在无菌条件下反
复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同
样置
4
℃待其自然沉淀
5
～
10
分钟，取上清
5
ml
。上清液可直接接种或低温保存。
注：
如采样液中尚未加抗菌素，应在接种前补加，用量同上前，
混匀后置
4
℃
过夜或室温作用数小时后可接种。
临
床标本处理后，将原始标本分为三份，一份（
40
％）用于鸡胚
接种，一份（
30
％）用于
MDCK
细胞接种，一份（
30
< br>％）保存待复核
用。
对于病毒分离阳性的标本－
70
℃保存
6
个月，<
/p>
在收到国家流感中
心复核鉴定报告后，
按
照生物安全有关规定处理；
病毒分离阴性的标
本随时按生物安全
的有关规定处理。
（四）
、血清标本的采集与处理
血清标本多用于流感暴发时的血清学核实诊断及人禽流感待查
病例的
诊断。
血清标本采集应该包括急性期和恢复期双份血清。
急性<
/p>
期血样应尽早采集，
可在采集病毒分离标本时同时采集，
但不能晚于
发病后
7
天
。
恢复期血样则在发病后
2
～
4
周采集。
一般采集空腹血。
< br>单份血清不能用作诊断。
取一根至少能装
3 ml
以上，干净和
灭过菌的血清管做好标记，
并进行登记，登记的内容包括：医院名称，患者姓名，性别，
急性期
（
Acute
，
A
）或是恢复期（
Convalescence
，
C
）
，采样日期（
年，月，
日）
。
1
．
从患者手臂静脉采
2
ml
血，放入准备好的上述血清管中。
2
．
然后置室温数小时待血完全凝固。
3
．
150
0
～
2000rpm
离心
10
分钟，
收集血清于
1.
5
ml
无菌管中，
做好标记。
4
．
血清可
置
4
℃存放一周，存放超过一周需置
-
20
℃或以下保
存。
（五）
、流感病毒株的运输
需送国家流感中心实验室检测的病毒分离物，填写“流感
/
人禽
流感毒株送检单”
，在冻存后，在低温条件下，
送至中国疾病预防控
制中心病毒病预防控制所流感中心进行复核，
运输时遵守国家生物安
全的有关规定。
1
．流感毒株的送检要求
（
1
）自国家级流感样病例监测哨点医院采样，所
分离到的全部
毒株。
（
2
）自其它流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的流感病
毒，
单向血凝抑制效价与国家流感中心提供的标准参照血清相比，
有
4
倍或
4
倍以上差异的毒株。
（
3<
/p>
）自其它流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的流感病
毒，<
/p>
HA<8,
且网络实验室不具备
RT-
PCR
鉴定能力。
（
4
）暴发时采样分离到的所有流感毒株。
（
5
）
HA
阳性，用国家流感中心提供的标准参照血清进行
HI
试
验，
4
种血清的
HI
效价均≤
20
的毒株。
（
6
）所送检的毒
株要求每份
3ml
，并且无细菌污染。
（
7
）全国流感监测网络实验室直接将
毒株送至国家流感中心，
填写
“流感
/
人禽流感毒株送检单”
。
监测网络实验
室中的市级实验室