-
ABO
血型正、反定型操作规程
[
目的
]
保证
ABO
血型鉴定准确，确保临床输血安
全。
[
适用范围
]
XXX
医院输血科
[
职责
]
具有专业技术的工作人员主要负责本院输血
（或备血）
标本的
ABO
血型鉴定
（但
只对该单份标本负责）
。
[
相关文件
]
试剂采购、保存和使用管理程序
设备采购、使用管理程序
消毒与清洁管理程序
标本采集、运输、保存和报废管理程序
紧急用血管理程序
[
相关记录
]
仪器设备的采购、使用和维护记录
仪器的温度记录
恒温水温箱的换水和消毒记录
消毒液的配置记录
清洁消毒记录
试剂采购、使用记录
标本交接和报废记录
紧急用血记录
[
实验原理
]
ABO
血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在
A
凝集原的称为
A
型，
存在
B
凝集原的称为
B
型。而血清中还存在凝集素。当
A
凝集原与抗
A
凝集素相遇
或
B
凝集原与抗
B
凝集素相遇时，会发生红细胞凝集
反应。一般
A
型血清中含有抗
B
凝集素，
B
型血清中含有抗
< br>A
凝集素，
因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的<
/p>
红细胞反应（称为正定型）
，用标准红细胞与被测者血清中的凝集
素反应（称为反定
型）
，以确定其
AB
O
血型。
[
仪器器械
]
玻璃试管、玻片、记号笔、一次性
塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、
恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。
[
试剂
]
抗
A
标准血
清、抗
B
标准血清、
A
型标准红细胞、
B
型标准红细胞、
O
型标准
红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件的正
品。
[
标本收集与处理
]
1
．受检者血清：采集受检者静脉血
2
~
3ml
，经
1000r/m
in
离心
1
分钟或室温静
置
1
小时后取上清。
2
．
2
~
5%
的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成
2
~
5
％
红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。
3
．标本出现中度以上溶血者，为不
合格标本，不能用于检测。
[
实验方法与步骤
]
血型的正定型（试管法）
：
⑴、取
2
支
试管，分别标上抗
A
和抗
B
；
⑵、制备待测标本
2~5%
的红细胞悬液（取
1
支试管，加入
2ml
生理盐水，再加
入
1
滴待测标本红细胞，混匀备用）
；
⑶、在
抗
A
管中加入
2
滴抗
A
标准血清，在抗
B
管中加入
2
滴抗
B
标准血清；
⑷、在抗
A
和抗
B
管中分别加入
1
滴已制备好的待测标本
2~5%
< br>红细胞悬液；
⑸、混匀后，立即对称放入离心机中进行
1000r/min
离心
1
分钟，或室温静置
1
小时，再轻轻摇动试管，使沉
于管底的红细胞浮起，先肉眼观察有无凝集现象，如内
眼不见凝集，应将反应物倒于玻片
上，再以低倍镜检查。
⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注
意凝集强
度，此有助于
A
、
B
亚型、类
B
或
cisAB
的发现。
ABO
血
抗
A
标准血
抗
B
标
准血清
型
清
A
型
＋
－
B
型
－
＋
O
型
－
－
AB
型
＋
＋
⑺凝集强度判断标准
4
十
红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3
十
红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2
十
<
/p>
红细胞凝块分散成许多小块，
见到游离红细胞。
< br>
1
十
肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。
土
镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多
游离红细胞。
MF
混合凝集外观
(mixed
fiel
d)
是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细
胞仍呈分散
分布。
一
表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
血型的反定型（试管法）
：
⑴、取
3
支试管，分别标上
A
、
B
和
O
；
⑵、在
3
支试管中分别加入
2
滴待测标本的血清
；
<
/p>
⑶、将
ABO
标准红细胞轻轻地充分混匀
后，在
A
管中加入
1
< br>滴
A
型标准红细
胞，在
B
管中加入
1
滴
B
型标准红细胞，在
O
管中加入
1
滴
O
型标准红细胞；
⑷、混匀后，对称放入离心机中进行
1000r/min
离心
1
分钟（或
3400 r/min
离心
< br>15
秒）
；
< br>⑸、取出后，先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染）
，再轻<
/p>
轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察；
⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强度，此有助于
A
、
B
亚型、类
< br>B
或
cisAB
的发现。
ABO
血型
A
型标准红细胞
B
型标准红细胞
O
型标准红细胞
A
型
－
＋
－
B
型
＋
－
－
O
型
＋
＋
－
AB
型
－
－
－
⑺凝集强度判断标准
（同<
/p>
ABO
血型的试管法正定型）
[
质量控制和注意事项
]
1
、分型标准血清试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且
在有
效期内使用。
试剂开封后必须贴上注有开封日期和开封人的
标签，
使用后应及时置于
2~8
℃专用
冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。试剂开封后有效期为
一周。
2
、商用分型标准红细胞试剂必须为三证齐全
的合格产品，质量性能符合要求，
且在有效期内使用；
自制分型
标准红细胞试剂必须以
3
个健康者同型新鲜红细胞混和，
用生理盐水洗涤
1
~
3
次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原，再制成
2<
/p>
~
5%
的
红细胞
悬液备用。
试剂开封或制备后必须贴上注有开封或制备日期和开封人或制备人
的标签，使用后应及时置于
2~8
℃专用冰箱中保
存，以免细菌污染和变质而影响试验
结果。试剂开封或制备后有效期为一周。
3
、生理盐水启用后，有效期为二周。
4
、所有试剂在使用时，必须检查是否有浑浊、变色、凝集等变
质现象；凡可疑
者，必须更换新的试剂进行检测。若分型标准血清使用时间较长后，最好
用已知的
ABO
标准红细胞检查结果是否与已知的血型相符；若
分型标准红细胞使用时间较长
后，
最好用已知的分型标准血清检
查结果是否与已知的血型相符，
以防标准血清或红
细胞制品污染
、变质失效而造成鉴定错误。
5
、试
管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
6
、操作方法应按规定进行，一般应先加血清，后加红细胞悬液，以便容易核实
是
否漏加血清。
7
、
< br>IgM
抗
-A
和抗
-B
与相应红细胞的反应温度以
4
< br>℃为最强，但为了防止冷凝集
现象的干扰，一般仍在室温
(20
~
24
℃
)
内进行试验，
37
℃可使反应减弱
。
8
、离心时间不宜过长或过短，速
度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
用试管法进行
A
BO
血型的正定型时不能测出亚型（如
A
X
）
，需延长作用时间。
9
、
在反定型试验中，
如果受检者的血清或血浆与
O
型标准红细胞产生阳性反应，
则需要添加自身对照试验。如果自身对照试验为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如
果自身对照试验为阴性，则表明被检者血清或血浆中可能存在
ABO
系统以外其它系
统的抗体干扰，此时需做其它相关试验加以解决上述
定型问题。
10
、
< br>对含有较多自身冷凝集素的受检者，
在使用标准血清进行正定型时往往被误
定为
AB
型，
遇到此
种情况，
需用
37
℃生理盐水洗涤受检
者的红细胞
2~3
次，
以去除
吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。
11
、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。对
于可疑结果，必须更换所用的试剂，重新检测。
< br>12
、对于可能存在不完全抗原的时候，应在各反应中加入凝聚胺试剂，以检验不
完全抗原的存在。
13
、判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。
14
、
2
~
5%<
/p>
红细胞悬液的配制：先用生理盐水洗涤红细胞
3
< br>次，再根据下表进行红
细胞悬液的配制。
悬液浓度（
%
）
压积红细胞（滴）
盐水（滴）
2
1
40(2ml)
5
1
16 (0.8ml)
[
临床应用
]
用于检验人的
ABO
血型归属。