X5Hig-FidelityDNAPolymerase

到

3

’

DNA

聚合酶活性和

3

’

到

5

’

的外切酶活性

(

即校读活性

)

，能够纠正

DNA

扩增过程 中产生

的碱基错配现象，在标准缓冲液中其保真度约相当于普通

Taq DNA Polymerase

的

50

倍、

Pfu DNA Polymerase

的

6

倍。同时该酶还

具有快速的

DNA

合成速度，约相当于普通

Taq DNA Po lymerase

的

4-6

倍、

Pfu DNA Polymerase

的

8 -12

倍。该酶合成能力很强，即

使是复杂的模板，也能快速准 确的完成反应，尤其适用于对保真性要求高的

DNA

长片段的快 速扩增，如基因克隆、测序、定点突变、

SNP

分析等，也可用 于

DNA

片段的末端补平。使用聚合美

X5

超保真

DNA

聚合酶扩增得到的< /p>

PCR

产物无

3

＇端突出碱基，不可直接

用于

TA

克隆 ，可以直接连入聚合美特制的平末端

TOPO

克隆载体（货号< /p>

MF021

和

MF022

）

。

【

单位定义

】

用大马哈鱼精子

DNA

作为模板

/

引物，在

74

?C

、

30

分钟内，摄入

< br>10 nmol

的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量。

【

产品组份

】

X5 High-

Fidelity DNA Polymerase (1U/μl)

10×

X5 PCR Buffer

25mM MgSO

4

2mM dNTPs

100

μl

1.0 ml

1.0 ml

1.0 ml

【质量控制】

以

λ

DNA

为模板，能有效扩增

20 kb

的

DNA

片段；以基因组

DNA

为模板，能有效扩增单拷贝基因；无内切酶和外切酶污染。

【

适用范围

】

高保真扩增，长片段的快速扩增，如基因克隆、定点突变等；高

GC

含量、具有二级结构的复杂模板的扩增。

【

操作示例

】

按下表配制

PCR

反应体系

10×

X5 PCR Buffer

2

.5

μl

25mM MgSO

4

2mM dNTPs

2.5 ?

l

2.5 ?

l

建议的

PCR

< br>条件

：

95°

C

32-36 cycles of:

94°

C

53

–

64°

C

68°

C

68°

C

4°

C

2 min.

25 sec.

20-35sec.

15-30sec./1kb

5 min.

forever

Primer 1 (10

μ

M)

0

.5 ?

l

Primer 2 (10

μ

M)

0

.5 ?

l

Template DNA*

X5 High-Fidelity DNA Polymerase

ddH

2

O

补足至

10-200ng

0.5?

l

25 ?

l

【

备注

】

<*

模板量：

10~200

ng

基因组

DNA

，

10~30

ng

质粒，或

1~2

μ

l

RT-PCR

反应后的

cDNA

。以上举例为常规

PCR

反应系统，仅供参考。实际反应条件因模

板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件，并根据比例放 大或缩小反应体系

>

。

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。

X5 High-Fidelity DNA Polymerase

( with dNTPs

）

User Manual

Product Name

Units

Cat.#