免疫共沉淀实验原理及方法

免疫共沉淀实验原理及方法

免疫共沉淀（

CoIP

）概述及原理

免疫共沉淀

（

Co-Immunopr ecipitation

，

CoIP

） 是研究蛋白

-

蛋白间相互作用的经典方

法，

属于

免疫沉淀技术

的一类，

常被用于鉴定特定蛋白复合物的中未知蛋白组分。

免疫共沉

假设一种已知蛋白是某个大的蛋白复合物的组成成员，< /p>

那么利用这种蛋白

的特异性抗体，就可能将整个蛋白复合物从溶液 中

“

拉

”

下来 （常说的

“pull

-

down”

），进而可

以用于鉴定这个蛋白复合物中的其他未知成员。

免疫共沉淀的特点可以概括为两点，第一

是天然状态，第二是蛋白复合物 。

免疫共沉淀的优势：

与其他研究蛋白质相互作用技术（如

GST-Pull dow n

、酵母双杂交等）相比，免疫共沉

淀鉴定的相互作用蛋白是在 细胞内与目的蛋白发生的天然结合，

避免了人为的影响，

因此符

合体内实际情况，得到的蛋白可信度更高。

免疫共沉淀的局限性和注意事项：

1.

免疫共沉淀是建立在蛋白复合物成员间彼此紧密结合的基 础上，意味着松散结合的

蛋白组分很可能检测不到；

2.

由于蛋白质形成复合物以后，某些表位就会被掩盖，因此 可能导致使用某一种

pull-down

抗体，

无论怎么增加抗体浓度，

也极少能将不到一半的目标蛋白复合物沉淀出来，

如有必要最好使用多种不同抗体分别进行

CoIP

< br>；

3.

由于检测的是天然状 态，

因此在不同的时间和不同的处理下，

CoIP

拉下来的蛋白复

合物都可能是不同的，当然随着实验次数的增加，得到的蛋白 复合物成员也会越来越庞大；

4.

如果使用

Western Blot

的 方法检测的蛋白复合物中的目标蛋白，

则需要在试验前进

行预测 ，具有一定的冒险性；当然如果将蛋白复合物直接进行质谱分析就不存在上述问题，

但需 要得到较高纯度和浓度的蛋白复合物样品也非易事，并且成本较高；

5. CoIP

鉴定得到的蛋白间相互作用可能是直接作用也可 能是间接作用，

进一步区分还

需要进行

GST-Pull down

等实验检测；

6.

为了保证

CoIP

实验的可靠性和严谨性，需要使用复合物的不同成员分别独立进行

CoIP< /p>

实验，

并且结果应该能够彼此验证，

因为 原则上使用复合物的任一成员进行

CoIP

都会

得到其他所有成员

[1]

免疫共沉淀的一般操作流程（中英文对照）：