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常用大肠杆菌感受态
JM109,
DH5a , BL21
等的区别
1:DH5a
菌株
DH5a
是一种常用于质粒克隆的菌株。
DH5a
在使用
pU C
系列质粒
载体
转化时
,
可与载体编码的
β
-
半乳糖苷酶氨基
端实现
α
-
互补。可用于蓝白斑筛选鉴别
重组菌株。
基因型
:F -
,
φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA
-argF U 169, deoR
, recA 1, endA 1,
hsdR17(rk-
, mk+, phoA ,
supE44, λ
-, thi-1, gy rA 96, relA 1
2:BL21(DE3
菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体
T7
< br>启动子的表达载体
(
如
pET
系列的
基因。
T7
噬菌体
RNA
聚合酶位于
λ
噬菌体
DE3
区
,
该区整合于
BL21
的染色体
上。该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型
:F -, ompT , hsdS (rBB-mB
-, gal , dcm (DE3
3:BL21(DE3 pLysS
菌株
该菌株含有质粒
pLy sS
,
因此具有氯霉素抗性。
PLy sS
含有表达
T7
溶菌酶的
基因
,
能够降低目的基因的背景表达水平
,
但不干扰
目的蛋白的
表达。该菌适合表达
毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型
:F -, ompT hsdS(rBB-mB -,
gal , dcm (DE3, pLy sS , C amr
4:JM109
菌株
该菌株在使用
pU C
系列质粒载体进行
DNA
转化或用
M13 phage
载体进
行转
染时
,
由于载体
< br> DNA
产生的
LacZa
多肽和
JM09
编码
的
La
cZΔM15
进行
α
-
互补
,
从
< br>而显示
β
-
< br>半乳糖苷酶活性
,
由此很容易鉴别重组体菌株
基因型
:recA 1, endA 1, gy r A
96, thi -1,
hsdR17, supE44, re lA 1,
Δ(lac
-proA B
/F’[traD36,
proAB+, lacIq , lacZΔM15] 5:TO
P10
菌株
该菌株适用于高效的
DNA
克隆和
质粒扩增
,
能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型
:F -
, mcr
A Δ(mrr
-hsd RMS-
mcrBC , φ80
, lacZΔM15,
△
lac
Ⅹ
74, recA 1 ,
araΔ139Δ(ara
-leu7697, galU ,
galK , rps , (Strr endA1, nupG
6:HB101
菌株
该菌株遗传性能稳定
,
使用方
便
,
适用于各种基因重组实验
基因型
:supE44,
hsdS20(rB-mB -, recA 13, ara -14, proA 2, lacY1,
galK2, rpsL20,
xy l-5, mtl-1, le uB6,
thi-1
7:M110
或
SCS110
大多数大肠杆菌菌株中含有
Dam
甲基化酶和
Dcm
甲基化酶
,
前者可以在
GA
TC
序列中腺嘌呤
N-6
位上引入甲基
,
后者在
CCA
/TGC
序列的第一个胞嘧啶
C
-5
位置上引入甲基。
常用的菌株都会产生
dam,dcm
,
从而受到甲基化的影响
.
部分限制性内切酶对甲基化的
DNA
不能切割
,
如
F baI
和
MboI
等
,
一般生物公
司提供的内切酶说明中均有说明
。
大多数
酶切位点的甲基化不影响切割
,
而有些会影响
< br>,
如
XbaI, BclI
等
。而且甲
基化只发生在特定序列
,
以<
/p>
XbaI
为例
,
只有在位
点序列旁出现
GA
或
TC
,
该
XbaI
位
才会被甲基化。
而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法
:
(1
选用上述酶的同功酶
,
如
Sau3AI , DNA
识别切割位点与
MboI
相同
;
但不受甲
基化影响
;
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