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流
式
细
胞
仪
(FACSCalibur)
操
作
步
骤
一、开机程序：
1.
检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液
充满状态（鞘液为鞘液桶体积的
3/4
位
置，可以连续工作
3
个小时左右）
、
盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足
够空间容纳本批标本排弃的废液。
如果要添加鞘液，
要先释放鞘液桶中
气压。
2.
依次打开流式细胞仪
FACSCalibur
稳压器、主机开关、电脑开关，打印<
/p>
机。
3.
<
/p>
气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于
STANDBY
状态，做
Prime
，以
排除管路中气泡。
二、运行
FAC
SComp
软件、检查仪器状况
1.
制备三色标准微球样本。
一般情况向
1ml
鞘液
（或过滤
PBS
）
中加入
1
滴质控小微球，也可以根据
实际情况调节浓度。
2.
机器预热
5 min
，打开
FACSComp
软件，选择保持路径。选择所需校
正内容，如果使用的微球是新一批产品要
输入微球的批号
。<
/p>
3.
在软件界面左侧
Assay Selection
选项中选择质控类型，即实验过
程中是否需要清洗样品。
4.
5.
6.
7.
8.
上样品，
微球溶液上样之前要充分混匀。
功能键设置在“
RUN
”
。
仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。
FACSComp
软件运行完毕，显示结果通过测试。
做
Set
up
。
打印校正结果，退出
FACSComp
程序。
备注：在质控过程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度，但是
在调节
灵敏度（
Sens
）时，一定要用“
L
ow
”的状态上样，保证仪器灵敏度的准
确。在使用仪器过程中
要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“
Low
”
“
Standby
”状态。
三、样品分析软件：
CellQuest Pro
1.
保证机器预热
5
min
，打开
CellQuest
Pro
软件，选择“联机”
。
Acq
Connect
（
1
）
在弹出的界面中的选择数据存储路径（
Directory
菜单）
；
（
2
）
对实验样本进行命名；
（
3
）
对实验通道进行预设（
FSC,SSC,FL1-FL4
）
。
备注：如果界面被关闭，重新调出步骤：
2.
Wind
Show
Instrume
BD
Op
调出质控模板。
Cyto
BD
图
选
择
调
用
3.
画图
Op
Instrume
Set
（一
Do
选择画图工具（一般选择散点图）
，
Inspect
界面会自动弹出，对几
个常用选项进行设
定：将散点图选中（用鼠标点击散点图边框才能
够选中图形）
，
将
改为
,
更改横纵
Anal
Acquire>
坐标表示名称，设置十字象限。如果要做四色实验，则绘制四个图。
备注：第一个散点图横坐标为
FSC
，纵坐标为
SSC
。
（
1
）
设定获取细胞数目
：
一般获取
10000
个细胞。
Acq
Acquisi
（
2
）调出电压、阈值和补偿等界面。
（
3
）将所有补偿调为
0
。
从
工
具
栏
Cytometer
Compl
（
4
）将非
52
的阈值调为
0
。
Thre
（
5
）
FSC
和
SSC
一般用线性（
Lin
）
,
激光通道（
FL1-FL4
）一般用对数（
Log
）
。<
/p>
（
6
）调出细
胞计数器：
4.
上阴性对照
将阴性对照管混匀，上机
，功能键设置在“
RUN
”
,
散点图出现细胞
信号，第一个图：让细胞信号出现在自己看上去舒服的区
域；其他
三个散点图，要将细胞信号调整到阴性区域，即左下角区域。通过
Acq
Cou
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