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MTT
检测细胞活性的操作方法
一、
MTT
是什么
MTT
是一种粉末状化学试剂，全称为
3-(4,5)-dimethylthiahiazo
(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide
，汉语化学名为
3-(4
，
5-
二甲基噻唑
-2)-2
，
5-
二苯基四
氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。
二、<
/p>
MTT
法用来做什么
简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。
MTT
主要有两个用途
1
．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定
；
2
．细胞增殖及细胞活性测定。
三、为何
MTT
可以用来做上述工作
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性
MTT
还原为水不溶性的蓝紫色
结晶甲瓒（
Formazan
）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（
DMSO
）能溶解
细胞中的甲瓒，用酶
标仪在
490nm
波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内
，
MTT
结
晶形成的量与细胞数成正比
。根据测得的吸光度值（
OD
值）
，来
判断活细胞数量，
OD
值越
大，细胞活
性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）
。
四、实验所需材料
1
．
MTT
溶液的配制通常
MTT
配成的终浓度
为
5mg/ml,
须用
PBS
或生理盐水做溶剂。
市面上一般
MTT
的包装为
100mg,250mg
或
1g
1.1
对于
100mg
这样的小包装，厂家都是将
MT
T
放入小管中的，个人建议不要再用天
平称量分装，而应该一次
性将其全配制成溶液，如
100mg
用
20mlPBS
来溶解。具体做法：
预先在
50ml
离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入
20m
l PBS
，从中先吸取
500-1000ul
PBS
装入含
MTT
的小管
中，吹打若干次后将其移入
50ml
离心管，然后再混匀。可以
重复
几次，以使小管中的
MTT
不残留
于管内。将
MTT
完全混匀后，用
0.
22
μ
m
滤膜过滤以除
去溶液里的细菌，分装避光
(
避光袋或是黑纸、锡箔纸
包住
)
可长期保存于
-20
度。按细胞培
养板每孔需加
10ul
计算，一般每
96
孔板约需
1ml
，所以分装时可考虑每管分装
1ml
。
1.2
对于大包装，可按上述
方法称取一部分溶解，也有人将粉剂分装在
EP
管里，用的
时候现配，直接往培养板中加。
注意事项：
1.
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
配成的
MTT
需要无菌，
MTT
对菌很敏感
MTT
一般最好现用现配，过滤后
4
度避光保存两周内（
个人曾做过
4
度避光保存
4
周
的
MTT
溶液，效果仍
然不错）有效，或配制成
5mg/ml
保存在
< br>-20
度长期保存，避免反复冻
融，最好小剂量分装，用
避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当
MTT
变为灰绿
色
时就绝对不能再用。
MTT
有致癌性，用的时候小心
,
有条件最好带那种
透明的簿膜手套
.
2
．
MTT
甲瓒溶解液
2.1
二甲基亚砜
DMSO
，可以直接溶解，
无需配制，使用方便，溶解速度快，但对人体
毒性较大，
且需去
除原培养液，
在去除培养液的过程中，
可能会把结晶去掉，导致
结果不稳
定。
2.2
三联溶解液：
SDS10g
，
异丁醇
5ml
，
10M HCl
0.1ml
用双蒸水溶解配成
100ml
溶液，
该溶解液不需去除原培养基，但溶解较慢。
该溶解液因含有
SDS
，在低温保存的时候易
产生结晶，因此在用之前必须提前几小时
威斯腾生物
400-675-6758
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