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免疫共沉淀实验原理及详细步骤
研究蛋白之间相互作用必不可少的实验是免疫共沉淀
(CoIP)
,常被用于鉴定特
定蛋白复合物的中未知蛋白组分,因其具有可信度高的
优点,在现在基础医学
研究中广泛应用,本文将为您详解
CoI
P
的实验原理和操作步骤,实验刚入门
的同学必看哦。
一、实验目的
1)
检测
两种目标蛋白是否在体内相互作用
;
2)
找到
与目标蛋白在体内存在相互作用的新蛋白。
运用这项技术,说不定你会有新的发现哦
!
二、实验原理
CoIP
是利用抗原蛋白和抗体的特异性结合、以及
“Protein
A/G
特异性
地结合抗体
(
免疫球蛋白
)FC
段的现
象开发出来的方法。
目前多用
Protein
A/G
预先结合在
Argarose
Beads
上,使之与含有抗原
蛋白的
溶液
(
如细胞裂解液
)
及抗体
(
诱饵蛋白
X
抗体
)
反应后,
Bea
ds
上的
Prorein
A/G
p>
就能通过抗体吸附诱饵蛋白
X
,诱饵蛋白<
/p>
X
通过与靶蛋白
Y
相互
作用将其从细胞裂解液中分离出来,从而达到免疫共沉淀的目的。
三、实验材料
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