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RNA
的抽提与鉴定
背景
核糖核酸
(RiboNucleic
Acid
，简称
RNA)
是由至少几
十个核糖核苷酸通过磷酸二酯键
连接而成的一类核酸
,
因含核糖而得名
,
简称
RNA
。
遗传信息从
DNA
传递给
RNA
，再从<
/p>
RNA
传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻
译的过程。也可以从
DNA
传递给
DNA
，即完成
DNA
的复制过程
。这是所有有细胞结构的
生物所遵循的法则。在某些病毒中的
R
NA
自我复制
(
如烟草花叶病毒等
)
和在某些病毒中能
以
RNA
为模板逆转录成
DNA
的过
程
(
某些致癌病毒
)
< br>是对中心法则的补充。
三种常见的
RNA
信使
RNA
功能：蛋白质合成的直接模板
转运
RNA
功能：氨基酸的运载体
核糖体
RNA
功能：核糖体的组成成分，蛋白质的合成场所
其他小分子
RNA
核内不均一
RNA
成熟
mRNA
的前提
核内小
RNA
参与
hnRNA
的剪接与转运
核仁小
RNA
rRNA
的加工与修饰
/7SL-
RNA
胞质小
RNA
蛋白质内置为定位合成信号识别体组成成分
小的干扰
RNA siRNA
在
RNA
沉寂通道中起中心作用，
是对特定信使
RNA
（
m
RNA
）
进行降解的指导要素
实验原理
细胞中的
RNA
可分为信使
RNA
，转运
RNA
和核糖体
RNA
三类，这三种类型的
RNA
都存在
于细胞质中，所以从不同组织中提取的总
RNA
的本质就是细胞的裂解，
RNA
的释放，通过<
/p>
不同的方式去除蛋白质，
DNA
等杂质，
最终获得高纯度的
RNA
产品工艺。
实验目的
1
完整
RNA
的提取和纯化
,
是进行
RNA
方面的研
究工作
,
如
Nothern
杂交、
mRNA
分离、
R
T-PCR
、
定量
PCR
、
cDNA
合成及体外翻译等的前提。
2
临床诊断中的应用：病毒检测等
RNA
提取的方法及步骤
1
提取总核酸，再用氯化锂将
RNA
沉淀出来。
（该方法将导致小分子量
RNA
的丢失，目前该
方法的使用频率已很低。
）
2
在酸性条件下抽提，酸性下
DNA
与蛋白质进入有机相而
RNA
留在水相，而达到分离
RNA
的目的。
根据所用蛋白质变性剂种类不一样分为以下两种制备方法：
1
胍盐法：异硫氰酸胍和硫氰酸胍
2LiCl/
尿素法
以胍盐法最好，
对于从那些
RNase
含量很高的组织
（胰脏）
中提取
RNA
特别有效，
可使
RNase<
/p>
迅速变性，制备的
RNA
有较高翻译活性
。