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电泳出现拖尾现象
电泳出现拖尾现象，英文成为
smear
，就是弥散。
琼脂糖凝胶电泳拖尾是怎么回事？
1
：样品
浓度过高。这种情况稀释一下就行了。提质粒的时候常出现这种情况。
2
：蛋白杂质阻碍
< br>DNA
的泳动。提基因组
DNA
时常出现这种情况。
以上两种情况，拖尾都是在电泳条带的后面。
3
：样品破碎或是被降解
4
：存在
RNA
这两种情况，拖尾都是在电泳条带的前面。
PCR
产物电泳拖尾，主要从以下两
个方面考虑：
1
< br>、
PCR
产物自身原因：
往往由于酶量过多或酶的质量差，
dNTP
浓度过高，
Mg2+
浓度过高，退火温度过低，循环次数
过多，而造成
PCR
的非特异性产物过多。<
/p>
对策：
①减少
Taq
酶的量，
或调换另一来源的酶。
②减少
dNTP
的浓度。
③适当降低<
/p>
Mg2+
浓度。
④增加模板量，减少引物
的用量，减少循环次数，提高退火温度。
2
、电泳体系的问题：
（
1
）电泳缓冲液
TAE<
/p>
或者
TBE
的污染，建议更换缓冲液。<
/p>
（
2
）上样时样品漂了，建议增加上
样缓冲液的用量，
以及小心加样。
（
3
）
电压太高。
（<
/p>
4
）
适当把你的胶的浓度加大。
（根据你的片
断大小而定）
（
< br>5
）观察你的
marker
是否
也存在拖尾现象，作为对照。
PCR
拖尾及假阳性的原因及对策
<
/p>
拖尾现象：产物在凝胶上呈
Smear
状
态。
原因：
1.
模板不纯
不合适
3.
退火温度偏低
4.
酶量过多
、
Mg2+
浓度偏
< br>高
6.
循环次数过多
对策：
1.
纯化模板
2.
更换
B
uffer
3.
适当提高退火温度
4.
适量用酶
5.
适当降低
dNTP
和镁离子的浓度
6.
减少循环次数
假阳性现象：
空白对照出现目的扩增产物
原因：
靶序列或扩增产物的交
*
污染
对策：
1.
操作时应小心轻柔，
防止将靶序列
吸入加样枪内或溅出离心管外；
2
.
除酶及不能耐高
温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。
所用离心管及加样枪头等均应一次性使用。
3.
各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存
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