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微生物实验室
生物安全管理手册
***
疾病预防控制中心
生物安全管理体系文件目录
备注
序号
名称
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
实验室人员和项目准入制度
人员培训考核制度
人员健康监护制度
生物安全检查制度
实验室人员生物安全行为规范
事件、伤害、事故和职业性疾病报告制度
实验室生物危险标识使用规定
实验室内务管理制度
实验室菌（毒）
种和生物样本安全保管和档案
管理制度
实验室废弃物管理制度
实验室消毒隔离制度
实验室应急处置预案
实验活动生物安全标准操作规程
2
一、实验室人员和项目准入制度
1.
目的
规
范生物安全二级实验室的使用和管理，
保证操作人员，
实验对象
和环境安全，
确保检测结
果准确可靠。
2.
适用范围
适用于生物安全二级实验室安全运转及在此环境下的所有检测工作。
3.
职责
进
入生物安全二级实验室从事检测工作的所有人员严格按照本规定执行。
4.
具体要求：
4.1
概述
4.1.1
生物安全二级实验室用于对检验者和环境有中度潜在危险样品的各项实验，必
须符合
下列规定：
4.1.1.1<
/p>
具备操作资质的人员可在生物安全二级实验室内工作，
其他任何人
未经许可禁止进入
实验室。
4.1.
1.2
在实验室内的一切活动，必须遵照生物安全手册的规定进行。
4.1.1.3
实验室内污染的空气需通过高效过滤器后
方能排出室外。
4.1.1.4
实验
室内产生的污水，必须经过消毒后方可进入公共污水系统。
4
.1.1.5
实验室的所有废弃品，
必须通过高压灭菌后才能处
理和清洗。
必须携出实验室的中间
实验材料、
< br>更换维修的仪器设备、
也只有在确保无病原微生物污染的条件下，
才能携出实验
室。
4.1.
1.6
实验室内准备二级全排式生物安全柜，
所有可能造成污染
的能够置于生物安全柜内的
实验操作，置其内进行，以保证实验室内空间的安全。
4.1.2
实验室运行的安全性要求
本手册规定的各项要求，
首先是为了保证实验室的安全运行，<
/p>
包括防止实验室工作人员的感
染、
防止实
验室操作的病原微生物对环境的污染、
防止检测样品的污染，
保
证实验结果的准
确可靠。
4.1.3
实验室工作的质量要求
<
/p>
本手册规定的各项要求，
同时也是为了保证实验室的工作质量，<
/p>
即：
实验产生的各项结果和
数据，必须准
确可靠：实验室出具的检验报告，必须明确完整。
4.2
实验室操作规程
4.2.1
启动实验室
开始工作前半小时。开启实验室主电源，使实验室及生物安全柜投入运行。
开启顺序：①开启屋顶风机②开启全排风③开启空调④开启安全柜⑤打开房间紫外线灯。
4.2.2
个人防护
工作人员按照下列要求进行个人防护，才能进入实验室区域：
（
1
）在更衣室中换穿工作服和工作鞋
。
（
2
）在
清洁区内，根据实验要求做好防护。
（
3
）实验中需使用腐蚀性试剂时，在胶乳手套外加带一次性塑料手套；需要进行可能造
成
污染材料飞溅的操作时，需加戴防护面罩。
4.2.3
进入实验室
4.2.3.1
工作人员进入实验室时，每进入一道门，应将此门关好，再开
启下一道门。
4.2.3.2
进入实
验室后，关闭房间紫外线灯。
4.2.3.3
检查实验室运转是否正常。
4.2.3.4
做好开始实验的各项准备。
3
4.2.4
启用标本、试剂
一切准备工作就绪后，
才将标本和试剂从冰箱中取出，
< br>直接放入生物安全柜中。
用完立即归
位，使其在冰箱外停
留的时间尽可能短。
4.2.5
操作
4.2.5.1
严格按照试剂使用说明进行操作。
洗涤时避
免液体材料飞溅。吸取、
稀释液体时，将
吸管插入试管底部，用
吸球缓慢吸取，避免产生汽泡或汽溶胶。
4.2.5.2
离心时，应使用双盖封闭式离心机和全封闭试管，每管离心液总量低于最高容量
1
个刻度单位：平衡时不得有液体渗陋到管套中，离心机使用后立即用消毒液
擦洗消毒。
4.2.6
观察结果
不打开容器的观察允许在生物安全柜外进行，否则，必须在生物安全柜内观察结果。
4.2.7
准予携出实验室的材料
<
/p>
确保不含感染性的实验材料，才可以从实验室携出。容器表面应用
75%
乙醇消毒。
4.2.8
实验室清洁
每一实验步骤完成后，
均应清理台面。
所有用过的试
剂均应归还原位；
使过的吸管等长形器
材放入储存污物的盒内；
锋利品放入专用的污物盒；
纸巾软物品放入污物袋；
在台面上喷洒
75%
乙醇，保持
< br>20
分钟，然后以纸巾擦干。实验室的其他表面，也应经常用
75%
乙醇擦拭。
4.2.9
污染物品处理
放置污染物品的容器装满时，
应更换新的容器。
实
验结束后，
对用过的污染物品进行高压消
毒。
< br>
4.2.10
更换工作服。
工作完毕的更衣顺序是，先用消毒液浸泡手套
5
分钟，然后依次除去口罩、防护服、鞋套，
放入高压消毒袋内，再次浸泡手套后
除去手套，用
75%
酒精棉球擦面部裸露部位。
4.2.11
实验室消毒
每次工作完毕，生物安全柜内用
75%
酒精擦拭台面，消毒液消毒地面，开启紫外线灯照射
1
小时后，
逐一关闭实验室送风和通风设备
{
关闭顺序与开启顺序相反
}
。
4.3
实验记录与实验报告
4.3.1
实验记录
在实验室内，实验记录应使用铅笔书写。
记录内容应简明扼要，包括实验日期，
实验目的和
实验的基本条件等提示记忆的内容，
并较详细地记载
观察到的实际现象及数据结果。
要求字
迹应清晰，数字成行成列
，以避免录入错误。
4.3.2
实验记录带出实验室
将上述记录在纸张上的实验记录应用
80
福
尔马林，
密闭熏蒸消毒
6
小时后方可带
出实验室。
或阁着实验室玻璃窗由清洁区工作人员抄录一份。
4.3.3
实验记录录入计算机
实验记录必须在实验结束后
24
小时内录入
计算机。记录准确的实验报告和录入时间。再按
照由实验室带出的书写记录，准确地记载
实验结果和数据。录入后，书写记录保存
1
周，以
备查验。实验记录录入后，一般不得修改。因数据记录错误，录入错误，或实际观察到的实
验结果改变，
必须更改记录时，
不要删除已经录入
的描述和数据，
而应录入新的描写和数据，
并注明更改原因。<
/p>
4.3.4
实验室记录备份
每月一次，
将上月计算机的实验记录做出备份，
备份的实验记录不得修改。
实验室负责人应
定期检查实验记录，
核对备份与原始的实验记录，对记录中的缺陷提出修改意见。
4.3.5
实验记录的保存年限
实验记录保存一年。已使用的实验记录
(
出
具报告，发表论文，或以其他方式引用
)
，在使用
4
后再保存一年。如无特殊必要，备份的实验记录一般永久保存。
4.3.6
出具实验报告
在需要出具正式实验报告的场合，
报告由实验者填写署名，
交实验室负责人记录核对后签字，
再由单位签发人签字并加盖公章发出。
4.4
标本保管规则
4.4.1
标本进入实验室
4.4.1.1
出实验室采集的标本，本实验室统一登记编号，能反映出
标本的来源、种类、性质、
目的等相关信息。
4.4.1.2
有关单位送检的标本由实验室统一登记编号，
< br>注明送检单位、
送检时间、
种类、
性质、
实验目的等相关信息。
4.4.2
标本的保管
根据标本的性质、目的进行保存，每分标本分两份，一份检测时使用，另一份备用。标本因
各种原因损失时，启用后备标本，并重新备份。
4.4.3
标本的销毁
确定不用的标本，采用高压灭菌后焚烧的方式销毁。
4.5
实验室装备保养
4.5.1
实验室定期保养
实验室的定期保养按照提供实验室设备厂商的规定进行，主要是对机械和电器部分进行维
护。
4.5.2
实验
室仪器设备的保养和维护
实验室内的仪器设备的保养由实验室
工作人员进行。
维护有专业人员进行。
生物安全柜的滤
器必须按说明书规定的时间定期由专业人员更换，其它仪器设备也应根据实际需要清洁保
养。
4.5.3
实验室仪器设备的维修更换
仪器设备需要更新，
需要离开实验室进行维修，
或损坏需要更换，
以及必须临时进入实验室
使用，
使用完毕后必须撤出实验室的贵重仪器，
在撤出实验室之前必须以恰
当的方式严格消
毒，方可处理或重新投入使用。
4.6
意外情况处理
4.6.1
实验室意外事件的处理原则
4.6.1.1
造成或可能造成实验室污染，
< br>但未造成人身伤害的实验室报告，
由实验室负责人处理。
例如实验过程中。
由于标本、
试剂益处溅落造成操作台或地面的
污染等，
应立即喷洒消毒液
并覆盖浸透消毒液的纸巾，待消毒液
彻底浸泡
30
分钟后，对污染的物品进行清理。清理后
的物品高压灭菌。
并填写生物安全
2
级实验室意外情况登记与处理记录表，
实验室负责人应
指导这些处理活动，并检查处理效果。
4.6.1.2<
/p>
实验室事故可能造成气溶胶污染，
如压力容器或管道破裂、
离心机事故等，
应立即关
闭实验室，张贴禁止
入内的标识。用消毒液喷雾和紫外线照射污染的区域，
24
小时
再进行
终末消毒，
实验室负责人除立即采取对应措施外，
应向上级部门报告，
并填写意外情况登记
与处
理记录表。
4.6.1.3
实验室工
作人员在没有强毒微生物时，
在实验室内受到意外伤害，如割伤、
烧伤、烫
伤等，
在实验室内昏倒或发生身体严重不适，
也有实验室负责人处理。
令受到伤害的人员立
即停止工作，
用消毒液清洗未破损的平凡表面，
伤口以碘伏消毒
，
眼睛用无菌生理盐水冲洗。
由在同一实验室内人员或派人迅速
着装进入实验室，清除造成伤害的原因，清理实验材料，
帮助受伤人员紧急处理并撤离实
验室。
受到伤害的人员应进行治疗并休息，
在身体状况未恢
复之前，不得重新进入实验室工作。
实验室在经过整理，
消除了造成伤害的故障之后，
方可
5
重新使用。
4.6.1.4
伤害事故可能导致被强毒微生物感染，
例如
针头刺破、
锐器割伤、
黏膜暴露等途径接
触到感染性液体，或在操作过程中发生培养物、污染材料溅落身体表面，意外接种等情况，
首先进行局部处理，
用肥皂和水清洗污染的皮肤，
挤压伤口
尽可能挤出损伤处的血液，
用肥
皂和清水冲洗，
用消毒液浸泡或涂抹消毒，
并包扎伤口。
暴露的黏膜应
尽快用生理盐水或清
水冲洗干净。
实验室负责人应向上级部门报
告，
对受伤害者进行隔离观察，
同时根据情况预
防性用药，并写出职业暴露后预防感染的评价和处理方案。
4.6.2
实验室人员的隔离观察
<
/p>
发生可疑的实验室感染事故时，应对被感染的人员进行隔离观察。如果判定为法定的传
染病感染，应按
[
传染病防治法
]
的规定报告，同时给予有效的隔离治疗
二、人员培训考核制度
1.
目的
规范实验室相关人员的培训考核
2.
适用范围
适用于生物安全涉及的所有工作人员
3
、
人员培训考核制度
3.1.
实验室工作人员的培训
新工作人员进入实验室前，
必须经过培训，
取得进入实验室工作的资格。
培训由实验室负责
人组织进行，并
指定熟悉实验室工作的人员担任辅导。培训内容包括：
（
1
）相关检验的国家诊断标准、处理原则以及本手册内容。
（
2
）实验室所有设
备的使用方法。
（
3
）个人防护方法。
（
4
）实验室基本技术。
（
< br>5
）实验室消毒净化的方法。
3.2.
实验室工作人员的资格考试
新工作人员经过培训后，
由实验室负责人组织考核。
通过考核后，
还须与有资格的工作人员
一同工作<
/p>
3
个月，才能获得独立进行实验室操作的正式资格。
三、
人员健康监护制度
1.
目的
规范实验室相关人员的健康监护
2.
适用范围
适用于生物安全涉及的所有工作人员
3
、人员健康监护制度
3.1
工作人员从事工作前必须进行
HIV
抗体和甲肝、乙肝、丙肝等肝炎病毒标记物的检测，
每半年进行一次
HIV
抗体复检，并保留血样一年以上。
3.2
工作人员应每年进行一次体检，并将可能涉及生物安全危
害的体检结果存档，以便判断
生物安全危害是否发生。
3.3
实验室应建立人员健康监护档案，档案内容包括既往病史、检测
结果、免疫接种史等，
以便对从事涉及生物安全危害人员的健康状况进行跟踪。
3.4
实验室工作人员的适合工作状态
实验室工作人员必须在身体状况良好的情况下，才能进入实验室工作。出现下列情况，<
/p>
不应进入实验室：身体出现开放性损伤；患发热性疾病：感冒、上呼吸道感染；其他导致抵
抗力下降的状况：妊娠、在实验室内连续工作
4
小时以上或其他原因造成的疲劳状态。
四、生物安全检查制度
6
1.
目的
规范实验室生物安全，保证设备正常运行。
2.
适用范围
适用于生物安全涉及的仪器设备（比如生物安全柜等）
3
、
生物安全检查制度
实验室内，每
2
个月以细菌培养的
方式进行安全性检测。生物安全柜内放置平板培养基
2
个，实验
室
4
角和中间各放置
1
个，半污染区放置
2
个。将平皿敞开
< br>5
分钟，然后盖上，
每平板菌落数平均不得超过
2
个，超过标准，需要对实验室或污染部位进行甲醛熏蒸消毒。
五、实验室人员生物安全行为规范
1.
目的
规范实验室人员的生物安全行为规范
2.
适用范围
适用于生物安全涉及的所有工作人员
3
生物安全组织管理与行为规范
3.1
组织框架图
< br>单位法人
{
或授权
}
负责人
↓
实验室负责人
↓
生物安全员
↓
实验室工作人员
3.2
各类人员相应行为规范
3.2.1
单位法人
{
或授权
}
负责人
< br>（
1
）负责组织生物安全实验室的立项、选址，施工队的
资质验证。
（
2
）负责成立生物安全委员会负责生物安全，制定管理制度，监督有关法规和操作规程的
执行情况。
（
3
< br>）负责组织对造成外环境污染、实验室污染、人身伤害事故的调查与处理。
3.2.2
实验室负责人
（
1
）组织制定安全手册、操作规程等文件。
（
2
）按照上述
文件要求组织实验室的各项工作，保证实验室运行的安全和实验室工作质量
的准确可靠。
（
3
）组织
进入生物安全二级实验室的人员进行业务培训，保证工作人员熟知微生物的操作
规程和技
术，
掌握实验室设备的特殊要求并熟练操作，
对培训的结果进行
考核，
决定进入实
验室工作人员的资格。
3.2.3
生物安全员
（
1
）对技术方法、化学品、材料与设备定期进
行内部安全检查，确保其符合国家和地方的
有关安全与卫生政策与标准。一旦发现不安全
因素，立即停止工作并上报实验室负责人。
（
2
）与有关人员讨论研究安全政策的问题。
（
3
）确认所有工作人员都具有进入实验室工作
的资格。
（
4
）为所有人员提供连续性的安全要教育与指导。
（
5
）针对操作程序、技术方法和各种条件要求的变更，以及新设备的引进
，为全体工作人
员提供最新的安全文献和信息资料。
（
6
）定期检查实验室的各项技术参数，组织对
实验室装备的常规保养。
7
（
7
）所有可能涉及潜在传染性或有毒物质
泄露的意外事件与事故，即使没有人员受伤或暴
露，也要予以调查，并向实验室负责人员
和安全委员会报告调查结果和提出建议。
（
< br>8
）当任何实验室工作人员的疾病或缺勤与工作有关，并被记录为可能的实验室获
得性感
染时，协助随访调查其疾病或缺勤情况。
（
9
）确保在发生传染性物质溅洒其他事件时，监督
消毒净化程序得到正确执行；并对这类
意外事件和事故进行详细的书面记录。
（
10
）确保任何需要
修理和维护的仪器设备在消毒与净化之后方可运出实验室。
生
物安全员由主管检验师以上的人员承担，
必须具备如下资质：
具
有实际工作的经验；
对操
作的微生物有全面、完整的了解；具有
组织实验室工作的能力；对工作有高度的责任心。
3.2.4
实验室工作人员
（
1
）生物安全二级实验室，只允许进行实验室
目的规定的操作，与此无关的活动一律不得
进行。
（
2
）必须按规定进行个人防护，方得进入实验室
。
（
3
）保
持实验室环境的整洁，每项工作完成之后，必须清理和清洁台面，离开实验室
（
4
）注意个人的健康状况，出现身体不适情况
，应及时向实验室负责人报告。
（
5
）实验室内禁止饮食、吸烟、访客和喧哗。
实验室工作人员的技术要求
（
1
）
必须了解实验室安全原理，
熟悉本手册的各项规定，
熟记紧急情况下的正确应对措施。
< br>
（
2
）掌握病原微生物操作的
基本要求，正确、安全地实用标本，避免污染，以获得准确、
可靠的实验结果。
（
3
）必须熟悉相关
实验的国家标准，能够完成标准所规定的任务。
（
4
）一旦发生意外，立即向生物安全员汇报。
4
、个人防护程序
4.1
个人防护用品的使用要求
4.1.1
口罩：
应使用
< br>N95
型口罩或
12---16
层棉纱口罩，
最好使用防溅口罩
{
如<
/p>
31860
型
}
如有
胡须应刮去，
使用应始终保持口罩与脸紧贴。
一次性使用口罩应在使用后
4
小时丢弃，
不能
重复使用，
不能与他人共同使用。如口罩遭到
分泌物飞溅或弄湿，
应严格洗手后，
带上清洁
< br>手套更换。
4.1.2
防护面
罩：实验人员在进行工作时应佩带防护面罩，防护面罩要求透亮度好，有较好
的防飞溅功
能，重复使用前应进行彻底消毒。
4.1.3
防护服：实验人员工作时应穿戴一次性防护服。最好是连体式，防水及抗静电性能好，
< br>无过滤作用。袖口、脚踝口应为弹性收口，面部、腰部应有弹性收口或拉绳收口。
4.1.4
手套和鞋套：鞋套应为一次性防水鞋套。手套为一次
性胶乳手套，须戴两副，外层手
套应根据需要及时更换。
4.2
个人防护用品的穿戴顺序
4.2.1
进入清洁区前穿上普通白大衣和实验室专用鞋。
4.2.2
进入清洁区时穿戴一次性口罩，手
术帽，一次性隔离衣、两副胶乳手套和两副一次性
鞋套。注意将手套和鞋套分别套在袖口
和裤口外。
4.2.3
戴
N95
口罩及防护面罩、穿防水隔离服、防水鞋套、再戴外层手套。
4.3
个人防护用品脱卸顺序
4.3.1
完成实验后，
在半污染区先用
75%
乙醇溶液消毒外层手套，
然后脱掉外
层手套
{
在脱另
一只手套时，手指只能
接触手套的里部
}
。
4.3.2
着内层手套依次脱掉防护面罩、
N95
口罩、防水鞋套及防水隔离服
{
脱隔离服时
，不要
接触隔离服的外表面，应从里反脱，以保里面超外
}
。将脱掉的物品放入专用消毒袋中就地
8
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