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乳腺癌
HER2
FISH
检测
-
检测意义、建议及标本
准备
HER2
与乳腺癌
< br>乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的一种，
正以每年
3
%
～
4%
的速度急剧上升，
已成
为女性的第一杀手。临床上大约
20-35%
的浸润性乳腺癌存在
HER2
基因的扩
增及蛋白的高
表达。
HER2
基因
(
又名
HER2
/neu
，
c-erbB-2)
位于<
/p>
17q12
，是表皮生长因子受体（
HE
R
）家
族成员之一，
HER
家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。
HER2
编码相对分子量
185KD
的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸
激酶活性。
HER2
是重要的乳腺癌预后判断因子，
HER2
阳性（过表达或扩增）的乳腺癌，其临床特点和生物学行为有特殊
表现，治疗模式也
与其他类型的乳腺癌有很大的区别。
HER2
检测方法有免疫组化（
IHC
）和荧光原位杂交（
FISH
）等。
《
2014
年
NCCN
乳腺
癌临床实践指南》和《乳腺癌
HE
R2
检测指南
2014
版》均强调：<
/p>
FISH
是检测
HER2
基因状
态的金标准。
一．检测意义
1.
判断预后：
HER2
阳性的乳腺癌浸润性强，无病生存
期短，预后差。
2.
指导治疗：<
/p>
HER2
基因扩增的乳腺癌患者对内分泌治疗药物（如他莫昔芬）
产生耐药。
HER2
基因扩增的乳腺癌患者对
< br>CMF
方案不敏感，宜采用大剂量蒽环类药物和紫杉醇类药
物方案；
HER2
基因扩增的乳腺癌患者明显受益于
Herceptin
（赫赛汀，
2001
年
FDA
批准上
市）
等靶向药物治疗。
二．检测建议
IHC
和
FISH
检测
HER2
的状态一致性很高，但也存在着差异，数据统计如下表
1
和表
2
示，对于
IHC
2+
样本必须要用
FISH
进一步确认
结果；
0
、
1+
或
3+
，根据条件，可再做
FISH
验证。
IHC
阴性
0
1+
2+
3+
表
1
：
(2004) HER2 Amplification Ratios by
Fluorescence In Situ Hybridization and
Correlation
with Immunohistochemistry
in a Cohort of 6556 Breast
Cancer
Tissues. Clinical Breast Cancer
FISH
阳性
56
211
415
660
阳性率
（
%
）
5.9
29.1
55.9
89.9
892
514
327
74
表
2
：
2007
年卫生部科教司牵头组织全国
73
家三级
以上医院历时
2
年完成
“
荧光原位杂交技术（
FISH
）
用于乳腺癌患者
Her-2
检测的临床研究
”
课题，
检测标
本达
3368
例
因此，
《
2014
年
NC
CN
乳腺癌临床实践指南》
和
《乳腺癌
HER2
检测指南
（
< br>2014
版）
》
均建议先进行<
/p>
HER2
蛋白的
IHC
< br>检测，
IHC 2+
样本进行
I
SH
（
FISH
、
DISH
或
CISH
）检测。
《
2014
年<
/p>
NCCN
乳腺癌临床实践指南》
三．样本准备：
< br>1
．标本类型：
(1)
手术切除
标本；
(2)
粗针穿刺活检标本；
(3
)
活检标本。
2
．标本固定：所有乳腺癌标本离体后都应尽快固定
（
1h<
/p>
内固定）
。固定时应将标本每隔
5
～
10 mm
切开，并可在组织间嵌入纱布或
滤纸等物。固定液量与所浸泡组织的比例应足够。
固定时间以
6
—
72h
为
宜。
3
．固定液类型：
4
％中性
(
磷酸缓冲
)
甲醛固定液。
4
．组织切片：
(1)
切片厚度
3-5um
；
(2)
应
有
HE
染色切片作为对照。
四．临床上哪些患者需要进行
HER
2
检测
1.
所有乳腺原发性浸润癌都应进行
HER2
检测；
2.
只要能获取肿瘤组织，对复发灶或转移灶也应该
进行
HER2
检测；
3.
如
HER2
检测结果为阴
性，但疾病复发且生物学行为提示可能为
HER2
阳性肿瘤时，
应重
复
HER2
检测；
4.
如
HER2
检测结果与组织病理学特征不相符时，
如组织学分级为
I
级的浸润性乳腺癌
HER2
阳
性，应重复
HER2
检测。
组织学
1
级的类型腺癌：
?
浸润性导管或小叶癌，
ER
和
PR
阳性
?
小管癌（至少
90%
为纯小管癌）
?
粘液癌（至少<
/p>
90%
为纯粘液癌）
< br>?
筛状癌（至少
90%
为纯筛状
癌）
?
腺样囊性癌（至少
90%
为纯腺样囊性癌）且常为三阴性
乳腺癌
HER2 FISH
检测
-
判读
一．信号观察流程
1.
首先在
HE/IHC
切片上确认肿瘤区域；
2.
在
10×
物镜下，于
FISH
标本上找到与
HE
染色切片上相同的组织细胞结构；
3.
在
40×
物镜下扫
描整张切片，观察是否存在异质性，要求至少找到
2
个浸润癌区
域，计数
至少
20
个浸润癌细胞。满意
的标本应是
75%
以上癌细胞核中有杂交信号；
4.
在
100×
物镜下观察癌细胞核的
FISH
结果进行信号计数
，注意上下调整焦距，以免遗漏信
号。
二．实验失败、不能判读的情况
1.
因操作等原因，细胞核被损坏，边界不完整；
2.
组织过度消化，细胞核边界不完整，
DAPI
染色浅；
3.
组
织消化不足，
25%
以上的细胞核无信号；
4.
自发荧光很强或细胞核分辨差，
10%
细胞核外有信号。
三．计数要求
1.
< br>计数区域可结合苏木精伊红染色进行肿瘤细胞标识；
2
.
选择具较好核分界的区域，要求细胞核大小基本一致、边界完整，
DAPI
染色均匀、核无
重叠，绿色着丝粒信号清晰；
3.
随机计数确定的肿瘤区域中
20
～
30
个细胞核中
的双色信号，不要主观选择信号多的核计
数；
4.
不要计数仅显示一种颜色信号的
细胞核；
5.
避免计数分裂像的细胞
核或被细胞核分裂及边界不完整核；
6.
如果
2
个同样大小的橘红信号之间距离不足一个常规橘红信
号大小，只计为一个信号；
7.
若红
、绿两信号的比值
>20
或众多信号连接成簇时可不计数，视为
基因扩增；
8.
若为临界值，则需要
再计数
20
个细胞核中的信号或由另外一个观察者重新计数，如
仍为
临界值，则应在
FISH
检测报告
中注明，或换其它方法或其它蜡块重新检测；
9.
若
HER2
基因扩增在不同癌细胞中存在异质性时
，应在另一癌区域再计算
20
～
30<
/p>
个癌细
胞核中的红、绿信号值，报告其最大值，并加以注释；
10.
判读时可以将乳腺组织中的正常细
胞
(
如成纤维细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、正常乳
腺上皮细胞
)
的
HER2
信号和
CSP17
信号作为内对照。
一些常见信号类型及计数方法
[
摘自
乳腺
癌
HER-2
基因检测试剂盒（
FIS
H
法）说明书
—
Abbott
Moleular Inc.]
四．结果判读
在清晰的肿瘤区域，<
/p>
按以上计数要求在至少
20
个核内计数<
/p>
GSP HER2
（红色）
和
CSP17
（绿色）信号，分别记录
GSP HE
R2
和
CSP17
的信号总数，再计算
平均每个细胞
HER2
拷
贝数、平均每
个细胞
CSP17
拷贝数以及
GSP
HER2
和
CSP17
比值。
A
．若
HER2/C
SP17<2.0
，且平均
HER2
拷
贝数
/
细胞
<4.0
< br>，
HER2
阴性
；
B
．若
HER2/CSP
17<2.0
，且平均
HER2
拷贝数
/
细胞
<6.0
，但
≥4.0
时，
HER2
结果不确定
；
C
．若
HE
R2/CSP17≥2.0
，或
HER2/CSP17<2.0
而
HER2
拷贝数
/
细
胞
≥6.0
，
HER2
阳性
。
《乳腺癌
HER2
检测指南
2014
版》