-
iQ
?
5
使用快速指南
————如何用
iQ
?
5
运行一次实验
2.1.1
综述
1.
创建、选择或修改一个反应程序文件（
Protocol
file
）
2.
创建、选择或修改一个反应板设置文件（
Plate
Setup file
）
。
3.
点击“
Run
< br>”键。
4.
以选定的反应板设置文件和反应程序文件进行反应
2.1.2
反应程序文件（
Protocol
file
）设置指南
用户可以在
Workshop
模块中，创建一个新的反应程序文件，或是直接选
择或修改一个已有的反应程序文件。
2.1.2.1
选择一个已有的反应程序文件
1.
点击“
Protocol
”键，在弹出的浏览器中选定所要选择的反应程序文件的路径。
2.
点击所需的反应程序文件的文件名，此时该文件的具体设
置在“
Selected
Protocol
”窗口中显示出来。
注意：
iQ
?
5
< br>软件安装后，里面会自带一些我们设置好的反应程序文件作为示例，用户可以直接调用它们。
2.1.2.2
创建或修改一个反应程序文件
在“
Selected Protocol
”窗口点击“
Edit
”键即可对当前的反应程序文件进行修改；
在“
Selected
Protocol
”窗口点击“
Create
New
”键即可创建一个新的反应程序文件。
无论点击“
Edit
”或“
Create
New
”键，软件都会自动切入“
Protocol
Edit
”窗口。
这个窗口下部有一
显示反应内容的表格，用户可以在其中按自己的需求进行修改。
1.
修改保温时间和保温温度。
“
Dwell Time
”列设置保
温时间，
“
Setpoint
”列设置
保温温度。
如果用户要设置一个
10
秒的保温时间，那就要在相应格中输入
0
：
10
或者
0.10
。
2.
选择荧光数据收集步骤
“
Data
Acquisition
”列用于设置荧光数据收集步骤。其中“
Real-Time<
/p>
”选项用于荧光定量，
“
Melt
Curve
”
用于熔点曲线分析。
注意：如要进行荧光
PCR
实验，必须保证程序中至
少有一个荧光数据收集步骤。
3.
插入循环或步骤
在表格中“
Cycle
”列有数字显示的行，点击该行“
I
nsert
”列的“
+
”
，即可完成循环插入，系统默认插入
的循环在当前循环之后。
在表格中“
Step
”列
有数字显示的行，点击该行“
Insert
”列的“
+
”
，即可完成
步骤插入，系统默认插入的步骤在当前步骤之后。
4.
删除循环或步骤
点击某
Cycle
行“
Delete
”列的“×”
，即可将该循环删除。
点击某
Step
行“
< br>Delete
”列的“×”
，即可将该步骤删除。
5.
文件保存
点击“
Save and Exit Protocol
Editing
”键，在随后出现的“
Save as
”对话框中输入程序文件的名称，再点击
“
Sa
ve
”键即可完成保存。
注意：点击“
Save and Exit Protocol
Editing
”键或“
Cancel and Exit
Protocol
Editing
”键才能退出“
Protocol Edit
”窗口。
2.1.3
反应板设置文件（
Plate Setup file
）设置指南
1.
< br>在
Workshop
模块中，用户可以：
a.
点击反应板设置文件显示区的“
Create
New
”键创建一个新的反应板设置文件；
b.
点击反应板设置文件显示区的“
Plate
”键，在浏览器中选择想要的反应板设置文件的路径并双
击其文件名，即可选中该文件；
c.
< br>点击反应板设置文件显示区的“
Plate
”键打开浏览
器，选择想要的反应板设置文件的路径并双
击其文件名，再点击“
Edit
”键即可对该文件进行修改；
d.
点击“
Data File
”键，在随后出现的浏览器中选择数据文件。点击其文件名即可打开其关联的反
应板设置文件，再点击“
Edit
”键即可对其进行修改。
2.
在“
Notes
”栏中输入或修改对该文件的说明。
3.
在样品体积（
Sample Volume
）
、封板类型（
Seal Type<
/p>
）
、反应容器类型（
Vessel Ty
pe
）各项设置中输
入或修改相应内容。
4.
输入或修改文件名。
5.
点击“
Select/Add
Fluorophores
”键选择本次实验所要使用的荧光染料种类，在软件中每种选
中的荧
光染料都会用一独特的图标表示。
6.
如果“
Whole Plate
Loading
”显示在取消状态，请选择该选项选项。注意当用户修改一个反应板设置
文件时，该选项为不可用。
7.
点击某一样品类型图标。
8.
用点击或拖曳来设定该样品类型对应的反应孔。
9.
点击某一荧光染料图标。
10.
用点击或拖曳来设定该荧光染料对应的反应孔。
11.
重复以上
7~8
两个步骤，直到所有反应孔第一荧光染料对应的样品类型全部设置完毕。
12.
如要取消某孔此前的所有设置，点击“
Delete
All
”键，再点击该孔。
13.
如要取消某孔此前的荧光染料设置，点击“
Delete
Fluorophore
”键，再点击该孔。
14.
如要某些反应孔第一荧光染料对应的样品类型为标准品
（
Standard
）
，点击“
Dilution Series
”键可设
置
其原始靶核酸数量。
以上为所有反应板设置文件共通的部分，
根据反应板设置文件对应类型不同，以下的步骤有所区别。
a.
单色荧光检测（
Single-
Color Experiments
）
15.
点击
“
Save & Exit Se
tup
”
键，
在随后出现的对话框中设
置文件名并进行保存。
该文件会以后缀为
“
.pts
”
的文件形式保存。
b.
多色荧光检测并启用“
Whole Plate
Loading
”选项（
Multi-Color
Experiments with Whole Plate Loading
Selected
）
15.
点击第二荧光染料对应的图标。
16.
如要取消当前选择的第二荧光染料，点击“
Delete
Fluophore
”图标并点击相应反应孔。
17.
点击“
Paint
Can
”图标。
18.
用点击或拖曳来设定第二荧光染料对应的反应孔。
19.
重复
7~8
两个步骤，直到所有反应孔第二荧光染料对应的样品类型全部设置完毕。
20.
重复
15~19
的步骤，把第三、第四荧光染料设置完毕（如有需要）
。
< br>
21.
点击
“
Save & Exit Se
tup
”
键，
在随后出现的对话框中设
置文件名并进行保存。
该文件会以后缀为
“
.pts
”
的文件形式保存。
c.
多色荧光检测并不启用
“
Whole
Plate Loading
”
选项
（
Multi-Color Experiments with Whole
Plate
Loading
Deselected
）
15.
点击第二荧光染料对应的图标。
此时会显示所有反应孔对应第一荧光染料会显示，
但其样品类型不
会显示。同样在设置第三及第四荧光染料时，此前的荧光染料对应的样品类型也不会显示。
< br>
16.
如要取消当前选择的第二荧光染料，点击“
Delete
Fluophore
”图标并点击相应反应孔。
17.
点击某一样品类型图标。
18.
用点击或拖曳来设定第二荧光染料及该样品类型对应的反应孔。
19.
重复
17~18
两个步骤设置其他反应对应第二荧光染料的样品类型。
2.1.4
反应运行指南
点击“
Workshop
”模块的“
Run
”键，软件即会切入“
Run-Time
Central
”模块的“
Initiate
Run
”界面。
2.1.4.1
开始运行一次反应
1.
在“
Initiate
Run
”界面选择所要使用的反应程序文件和反应板设置文件。
2.
选择孔间差异因子计算方式。
3.
点击“
Begin
Run
”键。
4.
在弹出的“
Save Optical Data File
”对话框中输入数据文件的文件名。
5.
点击“
OK
”键。
2.1.4.2
反应运行实时监控
在反应运行开始后，软件会切入“
Monitor
Run
”界面，在这里会实时显示反应状况。在反应结束后，
会自动弹出“
Run Status
”对话框。
如点击“
Yes
”
，软件会切入“
Data
Analysis
”模块显示本次反应的数据。如点击“
No
”
，软件会退回
“
Workshop
”模块。
2.2
数据分析指南
2.2.1
综述
“
Data Analy
sis
”模块的主要功能就是让用户进行实验数据分析。当用户刚打开
iQ<
/p>
?
5
软件时，
“
Data Analy
sis
”模块的切
换键显示为灰色不可选。
用户只有通过“
Workshop
”模块的“
< br>Data File
”界面选择一数据文件后点击“
A
naly
ze
”键，即可进
入“
Data
Analy
sis
”模块。
“
Data
Analysis
”模块分为以下六个功能界面：
1. PCR Quant&2. Melt Curve/Peak&3. End
Point&c Disc& Expr&6. Edit Plate
2.2.2
PCR Quant
界面设置指南
“
PCR Quant
”
界面主要的功能是设置本底和临界阈值等参数来进行
PCR
定量计算。
当这些参数设置完
成后，软件就会自动分析出每孔样品的临界循环数。如果用户之前设定了标准品，那么此时软件还会计算
出其他各孔样品的原始靶核酸含量。对于多重荧光
PCR
来说，任一种荧光染料对应的数据均可实现以上分
析功能。
在本界面中，主要实现以下设置：设置荧光
PCR
的本底；设置临界阈值；添加或删除需要分析的反应孔。
1.
“
Workshop
”模块中点击“
Data
File
”键。
2.
选择一个数据文件，点击“
Analyze
”键，软
件会自动切入“
PCR Quant
”界面，并自动设置本底和
临
界阈值。
3.
用户可根据需要，通过“
Analyze
Wells
”选项添加或删除需分析的反应孔。
4.
如果当前界面不是“
PCR
Quant
”界面，请点击“
PCR Quant
”切换键。第一次进入一个数据文件时，
软件会自动设置本底和临界阈值。如
果某个数据文件被修改保存后再打开，此时显示的是最近一次修改的
内容。
5.
按照需要手动调节本底。
6.
按照需要手动调节临界阈值。
7.
在手动调节时，用户可以随时通过右击曲线图选择“
Basel
ine Threshold
from the context menu
”返
回软件自动调节模式。
2.2.3 Melt Curve/Peak
界面设置指南
该界面用于分析双链
DNA
的熔点温度
（
Tm
值
）
。
用户可以通过加入能与双链
DNA
结合的荧光染料
（比
如
SYBR Green I
等）或荧光标记的杂交探针进行反应，再用该界面进行分析。
1.
“
Workshop
”模块中点击“
Data File
”键，选择
一个数据文件，点击“
Analyze
”键，软件会自动切
入“
Data
Analysis
”模块。
2.
点击“
Melt Curve/Peak
”切换键进入该界面，此时熔点曲线图及其峰图就会显示出来。
3.
用户可根据需要，通过“
Analyze
Wells
”选项添加或删除需分析的反应孔。
4.
右击熔点曲线图，在弹出的对话框中可以选择参数调整、
复制图表、打印图表等等操作。
5.
拖曳临界阈值条，将该值调整到合适的位置。
6.
用户可以在列表中选择某一峰，然后点击“
Delete
Selected
Peak
”即可在图中删除该峰。用
Shift
组
-
-
-
-
-
-
-
-
-
上一篇：酒店餐厅英语大全
下一篇：SAP系统操作手册及问题解决方案