教程英文-训练有素
铜银染色操作步骤
1.
试剂：
水合氯醛，多聚甲醛，二甲砷酸，蔗糖，氯化钠，右旋葡萄糖，无水
氯化钙，明胶，丙酮
，浓盐酸，硝酸银，硝酸铜，尿囊素，硼酸，四硼酸钠，吡
啶，无水乙醇，氢氧化钠，氢
氧化铵，
37%
甲醛，柠檬酸，铁氰化钾，硫代硫酸
钠，去离子水，多聚赖氨酸，中性树胶，二甲苯
2.
切片
：
20 um
3.
溶液配制
2.1
1%
硝酸铜溶液
硝酸铜
去离子水
充分混均
2.2
0.1%
尿囊素
尿囊素
去离子水
充分混均
2.3
0.4%
氢氧化钠
氢氧化钠
去离子水
充分混均
2.5
硼酸缓冲液（光敏性）
试剂<
/p>
A
：
0.2M
硼
酸
硼酸
去离子水
充分混均
1 g
100
mL
0.1 g
100 mL
0.4 g
100 mL
1.236 g
100 mL
试剂
B
：
0.05
M
硼酸钠
硼酸钠
1.908 g
去离子水
100
mL
往试剂
A
用加试剂
B
直到
pH
至
8.5
2.6
铜银溶液：
去离子水
120 mL
硝酸银
1.05 g
1%
硝酸铜
1 mL
0.1%
尿囊素
10 mL
吡啶
6 mL
无水乙醇
12 mL
硼酸缓冲液
6 mL
每次使用前于通风橱下新鲜配制，在光线较暗处进行配制。
2.7
银氨溶液
去离子水
60 mL
硝酸银
12 g
0.4%
氢氧化钠
30 ml
氢氧化铵
15
mL
去离子水
60 ml
每次使用于通风橱下新鲜配制，较暗出进行。
2.8
还原剂溶液
去离子水
135 mL
无水乙醇
15 mL
或
95%
乙醇
16 mL
37%
甲醛
180
uL
无水柠檬酸
(
精确称量
)
10.5 mg
或柠檬酸
(
精确称量
)
11.5 mg
2.9
铁氰化钾漂白溶液：
铁氰化钾
450 mg
去离子水
150 mL
充分混均。新鲜配制使用
2.10
硫代硫酸钠溶液：
硫代硫酸钠
150 mg
去离子水
150 mL
充分混均。新鲜配制使用
4.
染色步骤
4.1
用镊子从多聚甲醛溶液中取一
张含脑组织或脊髓组织切片的载玻片，置
于含去离子水的染色缸内，浸泡
1-5 min
。每隔
30 s
摇晃一次。然后用镊子取出
载玻片，擦干载玻片上多余的液体。连续
< br>5
次。
4.2
用
镊子将载玻片置于铜银溶液中，在
40
℃条件下，于摇床中慢摇
（
54
转
/min
）
45-50
min
。用镊子取出载玻片后，擦干载玻片上多余的液体。
4.3
于
丙酮溶液中浸泡
1min
。用镊子立即取出载玻片。
4.4
置于氨银溶液中，在室温下，于摇床上慢摇（
54
转
/min
）
28-32
min
，
用镊子取出载玻片后，迅速擦干载玻片上
多余的液体。
4.5
快速置于还原液中，于室温下，浸泡
45 s
< br>（注意观察切片颜色，如果颜
色较浅，可适当延长时间）
，取出后擦干载玻片上多余的液体。
4.6
用镊子将载玻片置于漂白液中，于摇床上，慢摇
3-5
min
。取出后擦干
载玻片上多余的液体。<
/p>
4.7
用镊子将载玻片置于去离子水中，浸泡
1 min
。取出后擦干载玻片上多
余的液体。
4.8
用镊子将载玻片置于去离子水中，浸泡
1 min
。取出后擦干载玻片上多
余的液体。
4.9
用镊子将载玻片置于去离子水中，浸泡
1 min
。取出后擦干载玻片上多
余的液体。
4.10
用镊子将载玻片置于硫代硫酸钠溶液中，浸泡
1 min
。取出后擦干载
玻片上多余的液体。
4.11
用镊子将载玻片置于去离子水中，浸泡
1 min
。取出后擦干载玻片上
多余的液体。
4.12
用镊子将载玻片置于去离子水中，浸泡
1 min
。取出后擦干载玻片上
多余的液体。
4.13
用镊子将载玻片置于去离子水中，浸泡
1 min
。取出后擦干载玻片上
多余的液体。
4.14
4.15
4.16
4.17
4.18
4.19
4.20
4.21
4.22
用镊子取出载玻片，于
50%
乙醇中浸泡
5
min
。
用镊子取出载玻片，于
70%
乙醇中浸泡
5
min
。
用镊子取出载玻片，于
95%
乙醇中浸泡
5
min
。
用镊子取出载玻片，于
95%
乙醇中浸泡
5
min
。
用镊子取出载玻片，于
100%
乙醇中浸泡
5
min
。
用镊子取出载玻片，于
100%
乙醇中浸泡
5
min
。
用镊子取出载玻片，于二甲苯溶液中浸泡
5
min
。
用镊子取出载玻片，于二甲苯溶液中浸泡
5
min
。
用镊子取出载玻片后，
于切片左侧滴
1-2
滴中性树胶，
然后盖玻片沿
45°
方向慢慢的将切片封盖。<
/p>
4.23
用记号笔标记载玻片，于显微镜下观察病理变化。
结果：溃变神经元及其轴突：黑色，正常组织：金黄色
备注：
所有溶剂都应该在干净的烧杯中，
用搅
拌棒搅拌，
然后在干净的玻璃
瓶中储存。采用
< br>50%
的硝酸对所有玻璃器皿进行清洗
（在通风橱下进行
），然后
迅速用蒸馏水冲洗，
最后用去离子水冲洗。
对每一步操作进行精确测量。
储存液
可以在室温下
于化学贮藏柜中保存至一年。
Amino-Cupric-Silver
Technique
Reagents:
cupric
nitrate,
Allantoin,
Sodium
Hydroxide,
Ammonium
hydroxide,
boric
acid,
sodium
tetraborate,
Sodium
thiosulfate,
potassium
Ferricyanide,
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