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各种类型的细胞器探针
线粒体
线粒体是细胞的能量工厂。<
/p>
因其参与了细胞凋亡，
这些年也成为研究的热门。
线
粒体的荧光探针主要有：
JC-1
< br>、
Rhodamine 123
等，
Invitrogen
还推出专门的
MitoTracke
r
系列探针。
JC-1
是用得最多的。它在浓度或线粒体膜电位低时，以单体存在，激发波长为
4
90 nm
，发射波长为
527 nm
，呈绿色荧光。当浓度升高或线粒体膜电位升高时，
JC-1
形
成
J-
聚体，呈橙色荧光，此时激发波长为
490 nm
，发射波长为
590 nm
< br>。
JC-1
最重要的应用是检测活细胞内线粒体的膜电位
，以及追踪凋亡细胞中的线
粒体变化。
Rhodamine
123
是一种能
渗透入细胞，
带阳离子的荧光探针。
它的激发波长为
505
nm
，发射波长为
534
nm
。活细胞摄取
Rhodamine 123
达到平衡的速度较快，只
需
5
分钟，通过激光扫描共聚焦显微镜观察，即可见到线粒体被
Rhodamine
123
染成绿色。当细胞被反复冲洗时，
Rh
odamine
123
通常不被细胞保留，但许多癌
细胞可较长时间保留这种染料，因此，它有助于某些癌症的诊断。
MitoTracker
系列探针则是
Invitrogen
专为线粒体而设计的。
MitoTra
cker
是
细胞通透性的，
只要与细胞
简单孵育，
就能被动渗透质膜，
在有活性的线粒体中
积累。
一旦线粒体被标记，
细胞就能用甲醛固定剂
固定，
一些
MitoTracker
探
针
能在固定之后保留在线粒体内。
这对致病细胞格外有用。
而一些探针在随后的去
污剂处理后还能保留，
这样就能用在免疫细胞化学或原位杂交中。
尽管传统的线
粒体
探针如
Rhodamine
123
也
很容易标记线粒体，
但是一旦线粒体的膜电位损失，
它们就很容
易被洗掉。这就限制了某些应用。
MitoTracker<
/p>
探针又分为好几种，且有红色、绿色和橙色。其中还原态的
Mit
oTracker Orange
CM-H2TMRos
和
MitoTracker Red C
M-H2Xros
在进入细胞后
不发出荧光，直到它们被氧化成
相应的线粒体选择性探针，并聚集在线粒体内。
红色的
Mito
Tracker
探针都适合于多色标记实验，
因为它们的红色荧
光能与其他
绿色荧光很好地区分开。
尽管有些
< br>MitoTracker
探针能实现固定细胞中的线粒体
标记，但这些染料还是只推荐给活细胞。如果你想要标记固定细胞，可以选择
OxPho
s
的抗体
+
荧光二抗。
内质网
内质网的功能有哪些？你还记得吗？复习一下，
内质网是细胞中由膜围成的分支
小管、
小囊或扁平囊状结构连通而成的管道系统，
可分为粗面内质网和滑面内质
网两种。
粗面内质网上
附着有核糖体，
是合成蛋白质的主要场所；
滑面内质网则
功能多样，比如在肝细胞中与解毒和糖代谢有关。
常用的
DiOC6(3)
及相似的
DiOC5(3)
都属于短
链羰花菁染料，它们广泛用于内
质网的研究，
包括神经元、
酵母中内质网的结构作用和动力学，
以及不同细胞类
型中内质网、
线粒体和微管的形态关系。
它们不仅可标
记活细胞中的内质网，
也
可以用于甲醛固定的细胞。
DiOC6(3)
进人细胞内与内质网结合，在激光激发下
发出绿色荧光，
根据内质网的形态学特征很容易识别。
需要注意的是，
在相对低
浓度时，
D
iOC6(3)
聚集在线粒体中，而在高浓度时，则可聚集于其他膜性细胞
器，包括内质网膜。