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Mitotracker
染色实验操作流程
1.
将细胞种植在
confocal
专用
DISH
里，密度为
2
×
10
4
；
< br>37
℃培养，
24-36h
等细
胞
完全贴壁后染色。
2.
准备好无血清培养基、移液器、枪头、避光盒等需要仪器；
3.
将
mitotracker
染色试剂用无血清培养基按
1
：
5000
的比例稀释，
DAPI
< br>试剂（罗
氏公司）用无血清培养基按
1:1000
比例稀释，然后放
37
℃孵箱里预热
10min
。
4.
移去
DISH
里的培养基，加少量无血
清培养基冲洗三次，去除残余含血清的培养
基；
5.
每个
DISH
< br>钟加入
500ul
预热的染色液，
放
37
℃孵箱里孵育
20-25mi
n
（
避光操作）
。
6.
加入
DAPI
染色液，
500ul/dish
，室温避光孵育<
/p>
10min
。
7.
移去染色液，
加入少量无血清培
养基冲洗三次，
最后加入
500-1000ul
无血清培养
基孵育细胞，准备用激光共聚焦显微镜拍照。
注：整个染色过程都要注意避光，避免荧光淬灭，影响染色效果。
< br>
Mito-Tracker Green (
线粒体绿色荧光探针
)
产品简介
Mito-Tracker Green
是一种线粒体
(mi
tochondria)
绿色荧光探针，可以用
于活细胞线粒体
特异性荧光染色。
Mito-Tracker Green
为采用
Molecul
arProbes
公司的
carbocyanine
进行了
荧光标记的一种
Mito-Tracker
，分子量为
671.88
，可以用作线
粒体特异性的荧
光探针。和
rhodamine123
或
JC-1
相比，
Mi
to-Tracker Green
对于线粒体的染
色不依赖于
线粒体膜电位。
Mito-Tracker Green
可以用于对活细胞的染色，但染色后如果固定会
导致
染色消退。
Mito-Tracker Green
呈绿色荧光，
检测时的最大激发波长为
490nm
，
最大发
射波长为
516nm
。
按最终工作浓度为
20-200nM
计算，可
以配制约
370-3700ml Mito-Tracker
Green
工作液。。
Theory
：
MitoTracker?
Dyes
—
Fixable
Probes Although conventional fluorescent stains
for mitochondria, such as tetramethylrosamine
and rhodamine 123, are readily
sequestered by functioning mitochondria, these
stains are easily washed
out of cells
once the mitochondria experience a loss in
membrane potential. This characteristic limits the
use of such conventional stains in
experiments that require cells to be treated with
aldehyde fixatives or