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一、实验室常见菌株简介
Xl1-Blue
菌株
基因型:
endA1 gyrA96(nalR)
thi-
1 recA1 relA1 lac glnV44 F?[Tn10
proAB+ lacIq
Δ(lacZ)M15]
hsdR17(rK
- mK+)
。
特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。
用途:分子克隆和质粒提取。
BL21(DE3)
菌株
基因型:
F
–
ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-
) λ(DE3
[lacI lacUV5
-T7 gene 1 ind1
sam7 nin5])
。
特点:
该菌株用于以
T7 RNA
p>
聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。
T7
噬菌体
RNA
聚合酶基因的表达受控于
λ
噬菌体
DE3
区的
p>
lacUV5
启动子,
该
< br>区整合于
BL21
的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的
表达。
用途:蛋白质表达。
BL21(DE3)ply
菌株
基因型:
F- ompT gal dcm lon
hsdSB(rB- mB-
) λ(DE3)
pLysS(cm
R)
。
特点:
该菌株带有
pLysS
,
具有氯霉素抗性。
此质粒还有表达
T7
溶菌酶的基因,
T7
溶菌酶能够
降低目的基因的背景表达水平,但不干扰
IPTG
诱导的表达。
适
合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。
用途:蛋白质表达
DH5α
菌株
基因型:
F- endA1 glnV44
thi-
1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG
Φ80dlacZΔM15
Δ(lacZYA
-argF)U169,
hsdR17(rK-
, λ–
特点:一种常用于质粒克隆的菌株。
其
Φ80dlacZΔM15
基因的表达产物与
pUC
载体编码的
β
-
半乳糖苷酶氨基端实现
α
互补,
可用于蓝白斑筛选。
recA1
和
< br>
endA1
的突变有利于克隆
DNA
的稳定和高纯度质粒
DNA
的提
取。
用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。
JM109
菌株
基因型:
endA1 glnV44
thi-
1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+
Δ(lac
-proAB) e14-
[F? traD36
proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK
-mK+)
。
特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达
,
< br>可用于
M13
克隆序列测定和蓝白斑
筛选。
用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。
DH10B
菌株
基因型:
F-
mcrA
Δ(mrr
-hsdRMS-
mcrBC)
Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 endA1 recA1 deoR
Δ(ara,leu)7697 araD139 galU galK nupG
rpsL λ
-
The most widely used
E. coli strain for BAC cloning is DH10B
。
host for pUC
and other α
-complementation vectors;
pBR322
useful for generating genomic
libraries containing methylated cytosine or
adenine
residues
,
useful
for plasmid rescue
procedures
。
ELECTROMAX DH10B T1 CELLS
说明:
DH10B
细胞是高转化效率的
E.
coli
,可以完美应用于大多数实验应用。
DH10B
基因型具有以下特点:
lacZΔM15
用于重组克隆的
蓝
/
白斑筛选
消除了
mcrA
、
mcrBC
、
mrr
和
hsdR
MS
限制系统,允许构建更多具有代表性的
基因组文库
(1,2)
endA1
突变,可以增加质粒产
量和数量
?
高效率转化大小为
150 kb
的质粒
,用于产生
cDNA
或基因组文库
<
/p>
DH10B?
可以表达
tonA
的基因型,
tonA
能够提供对
T1
和
T5
噬菌体感染的抗性
(DH10B? T1R)
。
DH10B
的基因型:
F ·
mcrA Δ(mrr
-hsdRMS-
mcrBC)
φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1
endA1 araD139
Δ(ara, leu)7697 galU galK λ · rpsL (StrR)
nupG
DH10B
T1R
的基因型:
F · mcrA
Δ(mrr
-hsdRMS-
mcrBC)
φ80lacZΔM15 ΔlacX74
recA1 endA1 araD139
Δ(ara, leu)7697 galU
galK λ
· rpsL (StrR) nupG tonA
Rosetta(DE3)
菌株
首先来
一些大肠杆菌表达的基本概念:
一个完整的表达系统通常包括配套的表达载体和表达
p>
菌株,如果是特殊的诱导表达还包括诱导剂,如果是融合表达还包括纯化系统或者
Tag
检
测等等。选择表达系统通常要根据实验目
的来考虑,比如表达量高低,
目标蛋白的活性,表
达产物的纯化
方法等等。主要归结在表达载体的选择上。
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