-
HE
染色技术
一、相关理论
A1
型
1.
病理切片
HE
染色的目的是
A
显示组织正常和病变的一般形态结构
B
保持细胞原有的形态结构
C
保留细胞内原有的特殊成分
D
保留细胞内原有物质的颜色
E
便于长期保存切片
答：
A
易
X
型
2.
显微镜下
HE
染色组织切片颜色是
A
细胞核呈蓝色
B
细胞浆呈红色
C
纤维和肌肉呈红色
D
胶原纤维等呈蓝色
E
脂类呈红色
答：
ABC
中
二、专业知识
A1
型
3.
HE
染色切片如出现核浆共染，结构不清，其主要原因是：
A
组织脱水、透明、浸蜡不足
B
组织脱水、透明、浸蜡过度
C
组织陈旧、腐败
D
分化时间过短
E
胞浆染色时间过长
答案：
C
中
X
型
染色中二甲苯的作用是：
A
减少组织收缩，避免细胞变形
B
溶解切片中的石蜡，以使染料易于与组织结合
C
起透明作用，以利光线透过
D
防止切片不洁污染
E
脱去福尔马林色素
答案：
BC
易
三、实践能力
A2
型
要使
苏木红对细胞核具有强的亲合力，
必须在苏木红染液加入媒染剂，
所谓媒染
1
剂是指能促进染色能
力，
本身能与织和染料发生结合，
能把组织染料联系起来的
试剂。配制
Harris
苏木精液常用的媒
染剂是：
A
硫酸铁铵
B
硫酸铝钾
C
三氯化铁
D
三氯化铬
E
硫酸氢钾
答案
B
难
A3
型
6.
苏木素分子中并不具备发色基，它仅仅是一种容易变成染料的变色物质，要使
苏木素变成真正的染料
（染液）
－苏木红，
必须使苏木素分子氧化变成酸性染料
苏木红，而苏木红和铝结合形成一
种带正电荷的蓝色色精。
问题
1.
配制
Harris
苏木精液常用的氧化
剂是：
A
钾明矾
B
红色氧化汞
C
氯化氢
D
硫酸铝
E
氢氧化物
答案：
B
中
问题
2
Harris
苏木精液配制的优点是
A
配制麻烦
B
容易形成沉淀
C
染色力强
D
染色力弱
E
染色方法复杂
答案：
C
难
A4
型
染色方法虽然是最常用、
最简单的染色方法，
但它的染色过程却是复杂的，
每一染色步骤都关系到切片质量，其中包括固定液的选择
、脱水、染色、分化、
还原等步骤。
问题
1
病理组织切片最常用的固定液是
A
乙醚乙醇固定液
B
95%
乙醇
C
Lugol
液
D
10%
福尔马林
E
Carnoy
固定液
答案：
D
易
问题
2
配制伊红染液时加入少量冰醋酸是作为
A
氧化剂
B
发色剂
C
分化剂
D
促染剂
E
媒染剂
答案：
D
中
2
问题
3 .
HE
染色分化、还原后应用乙醇的目的是：
A
苏木精染料的清洁
B
清洗二甲苯
C
使水分进入细胞
D
清洗伊红染料
E
去除组织切片中水分，为二甲苯透明做准备
答案：
E
易
问题
4.
HE
染色核最佳的着色是：
A
红色
B
黄色
C
黑色
D
粉红色
E
紫蓝色
答案：
E
易
X
型
8.
HE
染液中的助色团的作用是：
A
使染料分子染色度加深
B
使染料分子与被染物之间产生亲和力
C
使染料分子极性增强，易离子化
D
使染料分子电离为负离子，易与细胞结合着色
E
多为极性基团
答案：
ABCE
难
9.
HE
染色细胞核染色原理是
A
细胞核内的染色质主要是
DNA
B
DNA
两条链上的磷酸基向解，带正电荷
C
DNA
呈酸性
D
苏木精为碱性染料
E
DNA
很容易与苏木精以离子键或氢键结合而被染色
答案：
ACDE
难
染色盐酸酒精分化作用是：
A
促进细胞核着色
B
促进细胞还原蓝染
C
为细胞核还原蓝染做准备
D
去除核、胞浆、多余染料及过染
E
去除细胞核过多水分
答案：
CD
中
四、多项问题型
染色方法是目前病理诊断及研究工作最常用的方法之一，
其苏木素的配制
方法不断的改良，涌现了许多不同的配制方法。
问题
1
目前最常用的苏木素液配制方法是：
A
吉姆萨
B
哈瑞氏
3
C
埃利希
D
迈耶
E
巴氏
F
瑞氏
G
Weigert
铁苏木素
答案：
BCDG
中
提示：
苏木素分子中并不具发色团和助色团，
必须经过氧化后成为苏木
红才具有
染色功能。
问题
2
苏木红具有下列哪些发色团和助色团？
A.
–
N=N
–
（偶氮基）
B.
–
N=O
（亚硝基）
C.
＞
C=O
（酮基）
D.
＞
C=C
＜（烯烃）
E. <
/p>
–
NH
2
（氨基
）
F.
–
SO
3
H
（磺酸基）
< br>
G
.
–
OH
（羟基）
H.
–
COOH
（羧基）
答案：
ABCDEFGH
难
提示：要使苏木红对细胞具有强的亲和力必须加入媒染剂：
问题
3
媒染剂促进染色能力是：
A
本身与组织或染料发生结合
B
能把组织、染料联系起来
C
促进细胞核着色
D
促进染色能力
E
与组织发生结合，不与染料结合
F
与染料发生结合，不与组织结合
答案：
ABC
难
12.
伊红染液是
HE
染色方法必不可少的胞浆染液，伊红
Y
是煤焦油染料
，
Y
意
指带黄，是最常用的染料。
问题
1.
<
/p>
伊红
Y
的染色原理是：
< br>
A
含有一个醌型苯环的发光基
B
两个形成钠盐的酸性助色基
C
溶于水就能离解成带负电的色酸，即染料的有色部分
D
带正电的钠离子部分，即染料的无色部分
E
伊红
Y
是
煤焦油染料
F
氨基酸中氨基功能团和酸性染料结合
答案：
ABCDF
难
提示：伊红染液配制方法比较简单，最常用的配制方法
问题
2
0.5%
水溶性伊红液的配制方法
A
伊红
Y 0.5g
B
蒸馏水
100ml
C
先用
20ml
蒸馏水溶解伊红
D
研磨伊红粉
后加
20ml
蒸馏水溶解伊红
4
E
全
部溶解后加入全部
80ml
蒸馏水
F
滴加一滴冰醋酸
G
染色时间
1-5
< br>分钟
答案：
ABCDEFG
易
提示：如需染色快，着色佳需用醇溶性配制伊红
问题
3
醇溶性伊红配制方法
A
伊红
B 0.5g
B
80%
乙醇
100ml
C
伊红于乙醇内搅拌
D
染色时间为
1-3
分钟
E
研磨伊红
F
滤过后使用
答案：
ABCDEF
易
13.
石蜡切片经脱蜡入水洗涤后进入
Harris
苏木素染液中染色，
应该根据苏木素
液的陈旧与新鲜度来设置染色。
问题
1
新配制的苏木素液不同组织的染色时间
A
动物组织染色时间
5
分钟
B
新生儿组织染色
时间
5
分钟
C
陈旧组织染色时间
10
分钟
D
科研、教学切
片染色时间
20
分钟
E
坏死组织染色
30
分钟
F
坏死组织染色
60
分钟
答案：
ABCD
中
提示：苏木素液染色后需经盐酸酒精分化
问题
1
盐酸酒精分化的意义是什么？
A
使细胞核颜色达到适宜程度
B
脱去胞质及核内多余染液
C
核由深蓝色变成粉红色
D
核由浅蓝色变成蓝色
E
核由红色变成蓝色
F
核由红色变成蓝色
答案：
ABC
中
提示：如何控制分化过程
问题
3
分化过度和分化不足可出现的现象：
A
分化过度，核呈褪色状，颜色灰淡
B
分化过度，核轮廓模糊不清
C
分化不足时胞核过深
D
分化不足时，核、浆的境界不清
E
分化不足时，不能辨认核膜及染色质的结构
F
分化不足时，细胞质背景仍有浅蓝色
答案：
ABCDEF
难
石蜡组
织切片的
HE
染色
< br>1
．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，
4μm
切片。
5 <
/p>
2
．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（
I
）
5min
→二甲
苯（Ⅱ）
5min
→
100
％乙醇
2min
→
95<
/p>
％的乙
醇
1min
→
80
％乙醇
1min
→
75
％乙醇
1min
→蒸馏水洗
2min
。
3
．苏木素染色
5min
，自来水冲洗。
4
．盐酸乙醇分化
30s
（提插数下）
。
5
．自来水浸泡
15min
或温水（约
50
℃）<
/p>
5min
。
6
．置伊红液
2min
。
7
．常规脱水，透明，封片：
95
％乙醇（
I
）
< br>min
→
95
％乙醇（Ⅱ）
1min
→
100
％乙醇（
I
）
1min
→
100
％乙醇（Ⅱ）
1mi
n
→二甲苯石碳酸（
3
：
1
）
1min
→二甲苯（<
/p>
I
）
1min
→
二甲苯（Ⅱ）
1min
→中性树脂封固。
20111205
苏木素伊红（
HE
）染色
?
第一节
染色的基本知识
?
第二节
苏木素－伊红染色法
第一节
染色的基本知识
?
染色术语
?
1
染色：使染色剂和组织细胞结合，产生特定的颜色以利观察。
?
2
酸性染料：有一个反应性酸成分，能产生
H
＋，使其本身带
有负电荷的染料。
?
3
碱性染料：有一个反应性碱成分
,
能产生
OH
－，使其本身带有正电荷的
染料。
?
4
中性染料：酸性染料和碱性染料的复合物，其酸碱成分都是
反应性成分。
?
5
直接染色：染色剂和组织可直接结合着色。
?
6
间接染色：必须有第三种成分－媒染剂参与，才能使染色剂和组织有效的结合起来。
?
7
进行性染色：组织成分自浅至深，当达到所需要的强度时，
终止染色。
?
8
退行性染色：先把组织过度浓染，再用某些溶液脱去多余的
染色剂而达到适当的染色程度。
?
9
分化：选择性的除去多余染色剂的过程。
?
10
< br>蓝化：用碱性溶液（自来水、饱和碳酸锂等）处理已分化的切片，使苏木素的颜色显示最强的方法。
?
11
媒染剂：对染料、组织细胞都有亲和力，并能把它们联系起来的一种物质。
?
12
促染剂：能加强染料和组织细胞的结合能力。
?
13
正色反应：最后目的物质所呈现的颜色与染色剂的颜色相同。
?
14
变色反应：最后目的物质所呈现的颜色与当初颜色不同。
?
15
发色团：染色剂分子中，能够显示颜色的基团。
?
16
助色团：染色剂分子中，能促使染色剂和组织细胞相结合的基团。
?
17
色原：含有发色团的苯环化合物。
?
18
荧光染料：在荧光显微镜下，能显示荧光的染料。
19
常见染料发色团：
偶氮基
－
N
＝
N
亚硝基
－
N
＝
O
硝
基－
NO2
羰
基－
C
＝
O
烯
基－
C
＝
C
6
?
20
常见染料助色团：
?
氨
基
－
NH2
?
羧
基
-COOH
?
羟
基
－
OH
?
磺酸基
－
SO3H
?
染色剂
?
标准
?
具有鲜艳透明的颜色，且能与组织细胞结合，从结构上说就是必须有色原和助色团，单有
色原的化合物对组织细胞
无亲合力或易被褪色，具有助色团的染料才有电离的能力，能形
成一种盐类染料。
分类
?
1
按来源
A
天然染料：苏木素、胭脂红、地依红番红花、石蕊、靛蓝。
?
B
合成染料：甲基绿、苯胺蓝、亮绿等，种类最多。
?
C
无机化合物染料：硝酸银、氯化铜等。
2
按用途
?
A
胞核染料：苏木素、胭脂红等。
?
B
胞浆染料：伊红、酸性品红、亮绿等。
?
C
脂质染料：苏丹三、油红
O
等。
按发色团
?
A
亚硝基类：萘酚绿
B
。
?
B
硝基类：苦味酸。
?
C
偶氮类：桔黄
G
、苏丹类。
?
D
醌亚胺类：亚甲蓝、中性红。
?
E
山叮类：哌洛宁、伊红。
?
F
苯甲烷类：品红、亮绿。
?
G
蒽醌类：茜素、胭脂虫酸。
染色中的注意事项
?
1
染色器皿一定要清洁。
?
2
注意核对染料的有效期、分子式。
?
3
影响染色效果的是染色剂的新旧、浓度、
P
H
值，环境温度及染色时间。
?
4
染色过程中要随时镜检。
媒染剂和促染剂的区别
?
1
促染剂本身不参加反应，而媒染剂直接参加反应，它与染色剂直接形成沉着在组织间的有色物质－色淀。
7
?
2
促染剂对染色反应起加强作用。一般说来，无促染剂参加反应，反应也能进行，只是反应的强度不同；而媒染 剂
则在一些染色反应中是必不可少的。
分化剂
?
1
酸性分化剂：主要为盐酸、醋酸等。常用
< br>0.1
％－
1
％浓度的水溶液或
70
％的酒精溶液。
?
反应原理：组织在
酸性溶液中，吸附氢离子而带正电荷，从而使带正电荷的碱性染料脱掉，完成脱色作用。
分化剂
?
2
氧化分化剂：主要为苦味酸、高锰酸钾、高铁氰化钾等。
?
?
反应原理：利用
“
漂白作用
”
无选择
的脱掉切片上的着色，但对一些结合力较强的部位则不能彻底的脱色，而留下了
适当的颜
色。
分化剂
?
3
媒染分化剂：在染色时起媒染作用，而
染色后则可用来脱色，即为媒染分化剂。主要为钾明矾、铁明矾等。
?
反应原理：根据媒染剂
定义，用质量作用则可完成分化。当脱色用媒染剂量大于染色中所用剂量时，占有压倒优势
的媒染剂就能把已经和组织细胞相结合的染色剂夺取过来，完成脱色。
?
小
结
染色的原理染色就是染色剂和组织细胞结合的过程。
可从物理学和化学角度来解释。浸染与染色的区别，何为进行
性染色、退行性染色、分化
。直接染色、间接染色、媒染剂、促染剂染色原理。分化剂的种类，生物染色剂的要求。何
谓发色团及其种类，何谓助色团及其种类。染色剂化学性质分类及判断酸碱性的标准。
第二节
苏木素－伊红染色法
?
苏木素
< br>(Haematoxylin)
染料的简介：
?
是实验室中常用的染色
剂，是苏木树中提炼出的黄褐色粉末，
易溶于乙醇，也可溶于热水，其本身无染色能力，
但
经氧化后能氧化为具有染色性的苏木红。对细胞核、线粒体、髓鞘、肌原纤维等有良好
的染色效果。
伊红（
E
osin)
染料简介
?
是胞质常用的染色剂，属
于山叮类染料，化学名称为四溴荧光素二钠盐，常用伊红
B
（<
/p>
Y
）的
0.5%
水溶液或酒精溶
液，伊红
B
偏兰色调，
伊红
Y
偏黄色。
染色剂的常用配方
?
1
Harris
明矾苏木素液：
?
甲液：苏木素
1
克，纯酒精
20
毫升，
混溶。
?
乙液：钾明矾
20
克，蒸馏水
200
毫升，加温溶解。
?
在乙液呈小沸腾状时，将
甲液缓缓倒入，
继续加热煮沸
1
分钟；
停火后缓慢的加入氧化汞
0.5
克
,<
/p>
文火加热煮沸
1
分
钟后
,
迅速放入冷水内冷却
,
冷却过滤后即可应用。
2
E
hrlich
苏木素液
?
甲液：苏木素
2
克，纯酒精
100
毫升
，混溶。
?
乙液：钾明矾
15
克，蒸馏水
100
毫升，混溶。
?
丙液：甘油
100
毫升。
?
丁液：
冰醋酸
5ML
。
?
将乙、丙液混合调匀后，
再将甲液混入、调匀，加入丁液置于阳光充足处，松掩瓶口
1
－
3
个月即成。
3
0.5%
伊红酒精溶液
?
伊红
Y(B
)0.5
克
,80%
酒精
100
毫升
,<
/p>
混溶。
8
-
-
-
-
-
-
-
-
-
上一篇：十种你不知道的搜索引擎大公开
下一篇：word2007-xml存储标签属性说明文件