-
HE
染色和巴氏染色法
普通染色又称常规染色或
HE
（
Ha
ematoxylin and eosin
）染色。它是病理技术中最
常用的一种方法，
通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法，
以达到准确，
完整的
病理诊断。
一、染色目的病理学的所有切片，都必须通过一种以上的染料，通过各种不同
的方法，
将切片中各种不同的物质，在不同染液的作用下，
将其
显示出来，
使之在光学显微镜下，能
够完全的观看各种结构。<
/p>
例如，
HE
染色，
好质量的切片可以清晰地显示出许多不同的结构，
细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，
软骨着蓝色等。清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因
此，
染色技术也是病理技术中的重要组成部分，
必须不断地总结，
方能提高。
如果染色不好，
切片染色一团糟，
红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊
断，染色结果的
好坏直接关系到诊断的准确性。
二、染色的作用
< br>1
．化学作用：所有的染色液中，可把它们分为两种类型，一种为酸性，另一种为
碱
性。
酸性染料中有染色作用的为阴离子；
碱性染料中有染色作用的为阳离子，
每个细胞也存
在着两种
物质，
细胞核含的是酸性物质，
细胞浆含的是碱性物质。
在染色时，细胞核中的酸
性物质与苏木素染液中的阳离子发生作用，<
/p>
细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离子发生
作用，由于反应的
部位不同，结果着色有异。
2
．物理作用：在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此
时，
因受分子的引力作用，
色素微粒子被吸附而
着色。
由于各种组织有不同的吸附能力和不
同的吸附程度，
因此就可显出来不同的颜色来。一般来说，染色的学说还有许多，
但
说服力
强的仅有上述两种。
但不管怎么样解释，
实际上完成的每一种染色，
都与上述两种学说分不
开，
它们的作用是相辅相成，同时存在的。
三、染色方法及步骤
1
．人工苏木素，伊红染色法（
HE
法）
(1)
切片浸入二甲苯
中
5-10min
；
(2)
切片浸
入二甲苯中
5-
10min
；
(3)100%
酒精
1min
。
<
/p>
(4)100%
酒精
1min
。
(5)95%
酒精<
/p>
1min
。
(
6)95%
酒精
1min
。
(7)90%
酒精
1m
in
。
(8)80%
酒精
1min
。
(9)
自来水洗
1min
。
(10)
浸入苏木素染液浸染
10-15min
。
(11)
自来水洗
30second-1min
。
(12)1%
盐酸酒
精分化
30second
。
(13)
流水冲洗
15min
< br>以上。
(14)1%
伊红酒精
染
3-5min
。
< br>(15)90%
或
95%
酒精分
化
30sec
。
(16)95%
酒精
30sec-1min
。
(17)95%
酒精
30sec-1min
。
(18)95%
酒精
30sec-1min
。
(19)100%
酒
精
1min
。
(20)100%
酒精
1-2min
。
(21)
碳酸二甲苯
1min
。
(22)
二甲苯
1-2min
。
(23)
二甲苯
1-2min
(24)
二甲苯
1-2min
。
(25)
中性树胶封固。结果：细胞核被染
成深蓝黑色；细胞浆被染成粉红
色；软骨及钙盐被染成蓝色；胶原纤维染成淡粉红色，嗜
酸性细胞及嗜酸性颗粒呈鲜红色；
弹力纤维呈淡粉红色；某些蛋白性物呈粉红色等。染色
时的注意事项：
1.
切片用二甲苯脱腊，
应视不同的季节有不同的脱蜡时间，
在夏天，
室温
较高，
脱蜡较迅速，往往在
2-3min
就可脱蜡干净，二在冬季，时间应相对延长。
2.
切片在进入二甲苯前，可用电吹
风吹切片，使切片上的蜡处于熔解状态，这
样脱蜡较迅速，尤其是冬天，此法更可行。<
/p>
3.
切片上的蜡一定要清除彻底干净，
否则将影响染色，
造成切片染色不均的现
象。
4.
切片进行无水化处理，这一步骤
，一是可增加切片的附帖，二是可延长苏木
素的使用寿命。切片用二甲苯脱蜡后，不能直
接水洗，因二甲苯不溶于水，
必须经过酒精，
酒精可溶解二甲苯
，
又能与水混合，
按照以前教科书的要求，
切片在整个染色过程中，都不要让其干燥。经过多年的实践及经验，笔者认
为，切片
用酒精将二甲苯彻底消除后，在进入苏木素染液前，可用电吹风吹
干，这一步对于切片没
有充分的烤片时间，对于血块等的切片来说，尤为重
要，切片经此步骤，增加了附贴的牢
固性，减少切片在染色过程中脱离载片
的机会，保证了染色的成功率。另者，切片进入苏
木素染液全无水，可保证
了苏木素染液的浓度和
PH
值，延长其使用寿命。以往切片进入苏木素染液
前，
都须经水洗，
每次染色，
都带入不少的水分，
稀释了苏木素染液的浓度，
改变了它的
PH
值，使染液寿命缩短。
5.
切片无水化除了用电吹风外，还
可用火烧，切片用
90%
酒精洗后，取出切
片，用火轻烧，也可达到切片的无水化。火对切片有损害吗？否，经实验证
明，切片
火烧时最高温度为
80
℃左右，对切片没有影响。用火烧时必须
彻
底清除二甲苯，因为二甲苯燃烧时可产生浓烟，如果存留于切片，将会影响
观察。当然，用火时应特别注意防火，因为病理技术室的大部分试剂都为易
燃品。
6.
苏木素染液中的最佳染色时间，
确切地回答还是比较困难的，
因为各种组织
都有不同的染色时间，
核的染色时间从
30sec
至
15min
不等。
对
于核的染
色，为了充分地显示各种核染色质，一定要过染，尤其对于初学者来说，更
是如此。
7.
苏木素染液有多种，
常规应用的通常为明矾苏木素，
明矾苏木素又有
H
arris
苏木素，
Mayer’s
苏
木素，和
Ehrish
苏木素等。
8.
盐酸
酒精分化切片，浓度有
0.25%,0.5%
和
1%
根据各人的情况而使用。
这一步主要是将过染的颜
色及不该染的染色去除掉，
这一步要掌握得当，
必
须靠经验，核的染色清楚与否靠分化这一招，分化过度，核染色淡，分化不
足
，核染色质一团，分不清。初学者应于显微镜下控制分化程度。
9.
水洗
蓝化，也可用温热水来促使切片蓝化，可用氨水，碳酸锂等化学药品来
促蓝，虽然如此，
自来水冲洗蓝化切片是最好的，这对于切片的保存较为有
利。
10.
伊
红酒精浓度有
0.25%,0.5%
和
1%
之分，根据各单位的情况而定。切片
一放入伊红染液，即可马上着色，但是，要染好切片，必须染够染足时间。
11.
分
化伊红须用浓度较高的酒精，以往伊红染色以后，用低浓度的酒精分化，
洗去多余的染液，实践中发现低浓度的酒精褪色能力特强，如果掌握不好，
染上
的伊红，便会被褪去大部分。改用较高浓度酒精后，这种现象便不会出
现。
12.
作
为切片脱水剂的酒精，
要经常更换，
尤其是无水酒精，
更要保持其无水性。
否则切片脱水
不干净，含有水份就会褪色。切片取出后，不能令其干涸，即
刻进行下一步。
13.
碳
酸二甲苯，对于南方地区来说，是一种很有用的试剂，碳酸吸水性强，用
它可加强脱水，
它是二甲苯与酒精之间的缓冲剂，
切片经此试剂后更加透明
和光亮。有人认为碳酸为一种弱酸，切片用它后可能
会褪色，这种担心是多
余的，
切片褪色，
最主要是切片本身含有水份所导致。
根据我们的实验，
82<
/p>
年的切片经碳酸处理后，
17
年来颜色仍
然保持鲜艳就足以说明。
14.
二
甲
苯须换三次，以确保切片的透明度，这对于切片的观察和保存，都大有
好处。
-
-
-
-
-
-
-
-
-
上一篇：PDF文件使用技巧大全
下一篇：PDF文件结构详解