-
miRNA
靶基因验证
实验原理：
哺乳动物中不含内源性荧
光素酶，转录完成后生成有功能性的荧光素酶，其光产物具
有交到的量子效率，检测灵敏
度高，已被广泛应用于
miRNA
靶基因检测。
一般截取
mRNA 3
’
UTR
（野生型、突变型）区域
100
bp
长度构建到荧光素酶质粒上
实验方法
：
1.
质粒构建
预测
mRNA
与
miRNA
的结合位点后
，截取结合位点前后
100bp
长度构建到
pmirGLO
载体上，同时构建结合区域突变载体，如：
pmirGLO-mRNA-3
’
UTR
、
pmirGLO-
mut-
mRNA-3
’
UTR
2.
合成
miRNA mimics
及
NC
对照；
3.
细胞转染
,
细胞分组：（
1
）
pmirGLO-
mRNA-3
’
UTR + miRNA mimics
（
2
）
pmirGLO-
mRNA-3
’
UTR + miRNA mimics
NC
（
3
）
pmirGL
O-mut-mRNA-3
’
UTR + miRNA
mimics
（
4
）
pmi
rGLO-mut-mRNA-3
’
UTR +
miRNA mimics NC
4.
化学发光检测细胞
Luciferase
表达活性；
5.
数据分析。
-
-
-
-
-
-
-
-
本文更新与2021-02-27 21:27，由作者提供，不代表本网站立场，转载请注明出处：https://www.bjmy2z.cn/gaokao/676116.html