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经典猪高热病毒抗原
ELISA
试剂盒
JENO
Biotech Inc.
描述：
V
D
Pro
?CSFV
抗原检测试剂盒采
用双夹心
ELISA
法。
介绍：
C
SFV
抗原
ELISA
检测试剂盒是用
来检测
CSFV
感染的细胞、白细胞以及猪组织提取
物样品中是否存在
CSFV
抗原。
此检测方法快速、
简单、
特异性好，而且与其它瘟病毒
属病
毒如牛病毒性腹泻粘膜病病毒（
BVDV
< br>）和博尔纳病病毒（
BDV
）之间不存在交叉反应。
CSFV
抗原
E
LISA
检测试剂盒与反转录聚合酶链式反应（
RT-
PCT
）和病毒分离有很好
的相关性。
原理：
CSFV
抗原
ELISA
检测试剂盒是在抗
E2
单克隆抗体包被的
ELISA
板上
进行的。
白细胞、
组织匀浆液或组织培养液的提取样品或稀释样
品滴加到
ELISA
板的每一个孔里，如果样品
中存在病毒抗原
（
gp55
）
，
在滴加过氧化物酶连接的抗
E2
单克隆抗体和
TMB
显色液后颜色
会发生变化。结果用
OD
的比值来表示，由样品
孔中的
OD
值和阳性对照孔中的
OD
值得
出。
试剂盒成分
1. CSFV
抗
E2
单克隆抗体包被的板子
< br>………………………………………
....2
块
2. 10×
样品处理缓冲液（
STB
）
……………………………………………….
.30ml
3. 10×
洗涤液
…………………………………………………………………….100ml
4.
全血处理缓冲液（
WTB
）
……………………………………………..……
.100ml
5.
稀释缓冲液
< br>………………………………………………………………...….
50ml
6. HRPO
抗
-CSFV
连接液
………………………………………………..……..20ml
7.
强阳性对照（
SPC
）
……………………………………………………
……..1.0ml
8.
弱阳性对
照（
WPC
）
……………………………
……………………………
1.0ml
9.
< br>阴性对照（
NC
）
………………
…………………………………………..….
1.0ml
10. TMB
显色液
…………………
………………………………………………..20ml
11.
终止液
……………………………………………………………….
.………
.10ml
12.
指导手
册
……………………..………………………………………………
.1
份
重要的注意事项
在开始任一程序时请阅读下列注意事项。
警告
1.
不要混合不同批次试剂盒的成分。
2.
不要使用过期的产品。
3.
实验结束后，用蒸馏水洗涤仪器。
4.
注意防止试剂盒成分污染。
贮存注意事项
所有试剂储存在
2-8
℃，
直至过期。
使用时试剂恢复到室温，
使用完毕后继续放到
2-8
℃。
样品准备
样品可以储存在
-70
℃，但是为了得到准
确的结果尽量使用新鲜样品。
组织提取液
每一动物取
1-2
个组织，优先取脾、扁桃体、肺、脑、肠系膜淋巴结或肾。一般来说脾
和扁桃体样品得到的结果最敏感。
1.
用剪刀将
1-2g
的组织剪成小块。
2.
将组织块放入研钵，加
3-5ml1×
样品处理缓冲液
(STB)
，并加少量海砂。
3.
磨碎组织，室温孵育
1
小时并轻轻摇动。
4. 12,000×
g
离心
1min
（或
1,500×
g
离心
10
min
）
，取上清备用。
白细胞浓缩液
?
用
Fic
oll
密度梯度离心分离白细胞
1.
向离心管中
3mlFicoll
密度梯
度分离液
（
ex, Histopaque-1077?
）表面小心地覆盖
3ml
肝
< br>素或
EDTA
抗凝血液。
2. 1,000×
g
离心
10min
，
用移液管从离心管中吸取约
1ml
白细胞层，
然后与
0.5mlPBS
混匀。
3. 1
2,000×
g
离心白细胞
1min<
/p>
，弃上清液。
4.
用
300μl 1×STB
重悬白细胞
，涡旋机上充分混匀，
室温
孵育
1h<
/p>
并轻轻搅动。
5. 12,000×<
/p>
g
离心
1min
（或
1,500×
g
离心
10
min
）
，取上清备用。
?
用
Lue
coSep?
分离白细胞
1.
向
LuecoSep?(Gie
iner)
中加入
3ml Ficoll
密度梯度分离液
（
Histopaque-1077?
）
，
1,000×
g
离心
30s
。
2.
向
LuecoSep?
中加入
3ml
肝素或
EDTA
抗凝血液，
1,000×
g
离心
10min
。
3.
分离相（例如）
血浆
-
白细胞
-Histopaque-
< br>盘状物
- Histopaque-RBC
用移液管吸
取
1ml
白细胞层，与
0.5ml
PBS
混匀。
4. 12,000×
g
离心白细胞
1min
，弃上清液。
5.
用
300μl 1×STB
重悬白细胞
。涡旋机上充分混匀，
室温
孵育
1h<
/p>
并轻轻搅动。
6. 12,000×<
/p>
g
离心
1min
（或
1,500×
g
离心
10
min
）
，取上清备用。
全血
全血可能是筛选检查有效的样品
，
但敏感性较白细胞浓缩液差。
如果全血样品有阳性反
应，那么白细胞浓缩液或组织提取液也可以确定为阳性。
1.
轻轻翻转管子混匀全血样品。如何血液出现凝结，应重新
收集样品。
2.
全血样品与全血处
理缓冲液（
WTB
）等体积混匀，室温孵育
10 min
。
A
．微孔板：
500μl
全血和
500μlWTB
。
B
．圆锥形管：
5ml
全血和
5mlWTB
。
3. 12,00
0×
g
离心
3-5min
（或
1,500×
g
离心<
/p>
10
min
）
，弃上清液。
4.
吹散沉淀，加
等体积的
1×
STB
（微孔板为
100-
200μl
）
。涡旋机上充分
混匀，室温孵育
1h
并轻轻搅动。
5. 12,000×
g
离心
1min
（或
1,500×
g
离心
10
min
）
，取上清备用。
细胞培养物
1.
去除细胞培养基，用细胞刮刀从培养瓶刮取细胞。
2.
1,500×
g
离心细胞
10
min
，弃上清液。
3.
加
300μl
1×
< br>STB
，涡旋机上充分混匀，室温孵育
1h
并轻轻搅动。
4. 12,000×
g
离心
1min
（或
1,500×
g
离心
10 min
）
，取上清备用。
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