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药物分析的方法学验证所要做到的事项（一）
新药申报时，
药品质量标准中分析方法必须验证；
药物生产工艺
变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分
析方
法必须进行验证；
2005
版药典
中分析方法验证指导原则只规定了项
目和基本方法而没有合格标准
:
附录
XIX
A
< br>；中国
GMP(98)
非常关注验
证的过程
,
分析方法验证不完善是常见的问题
药物分析检验时药品生产的
GMP
的药物分析的方法学验证，
是保
证药物分析结果准确性的前提和基础，
也是实现药物分析检测
< br>GMP
的
必然要素。
构成药物分析中的检测方法验证，这要涉及到以下些方
面的内
容：
1
、分析方法验证成功的前提条件：
（！）仪器已经确认、校正并在有效期内
（
2
）经过培训的人员（
3
）
可靠稳定的对照品
（
4
）可靠稳定的实验试剂
（
5
）确认受试溶液的稳定性，在规定时
间内无降解。
2
、分析方法学验证所要求验证的内容：（
1
）含量的测定
（
2
）杂质
的含量测定
（
3<
/p>
）
药物的定性鉴定
（
4
）
药物的含量均匀度测定
（
5
）
药物的微生物检测
（
6
）药物的细菌内毒素的检测
验证内容：
< br>准确度：
准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近
< br>的程度，用百分回收率表示。
测定回收率
R
（
recovery
）的
具体方法可采用加样回收试验法来进行
测定。加样回收试验已准确测定药物含量
P
的真实样品
+
已知量
A
的
对照品（或标准品）测定，测定值
为
M
。数据要求
:
规定的范围内，
至少用
9
次测定结
果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测
三次
精密度：
（重复性、中间精密度和重现性精密度是指在规定条件
下，同一个均匀样品，经多次取
样测定所得结果之间的接近程度。用
偏差（
d
< br>）、标准偏差
(SD)
、相对标准偏差
< br>(RSD)
（变异系数，
CV
）
表
示。
（
1
）重复性
(repeatabil
ity):
在相同条件下，由同一个分析人员
测定所得结果的精
密度；
在规定的范围内，
至少用
9
次测定结果评价，
如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度
当作
100%
，至少
测
6
次进行评价
（
2
）
中间精密度同一实
验室，
不同时间由不同分析人员用不同设备
所得结果的精密度<
/p>
（
3
）重现性
(reproducibility)
不同实验室，不同分析人员测定结
果的精密度
（
4
）数据
要求：需报告
SD
，
RSD
和可信限。
专属性：
指有其他成分（杂质、降解
物、辅料等）可能存在情况
下采用的方法能准确测定出被测物的特性，
< br>能反映该方法在有共存物
时对供试物准确而专属的测定能力，
是指该法用于复杂样品分析时是
否受到相互干扰程度的度量
?
通常通过分析含有加了杂质、
降解产物、
有关化学物质或安慰剂成
分的样
品，
将所获分析结果与未加前述成分之样品的测试结果进行比
较
，两组测试结果之差即专属性
?
鉴别
反应
---
应能与可能共存的物质或结构相似化合物区别，
不含被
分析的样品，以及结构相似或组分中的有关化合物，均应呈负
反应
?
含量测定和杂质测定
---
色谱法和其他方法，
应附代表性图谱，<
/p>
亦说
明专属性。
图中应标明各组份的位置
，
色谱法中的分离度应符合要求
?<
/p>
杂质可获得的情况下，对于含量测定，试样中可加入杂质或辅料，
考察测试结果是否受干扰；
对于杂质测定，
也可向试样中加入一
定量
的杂质，考察杂质间是否得到分离
检测限：
检测限系指试样在确定的实
验条件下，被测物能被检测出
的最低浓度或含量。它是限度检验效能指标，无需定量测定
，只要指
出高于或低于该规定浓度即可。
?
非仪器分析目视法：
用已知浓度的被测物，
试验出能被可靠地检测
出的最低浓度或量
?
信噪比法
:
用于能显
示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），是
把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测
出的信号进行比较，算
出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比
3
∶
1
或
< br>2
∶
1
时的相应浓度或注入仪器
的量确定检测限
?
也可采用标准差法
：
空白值＝
0
时
；①测定背景
10
次以上，求出
标准
差σ
②将σ乘以三倍；
③在工作曲线
上求出
3
σ相对应的浓度
X
，
即为方
法的检出值；
空
白值不等于
0
；①测定背景
10
次以上，求出标准差
σ；②将σ乘以三倍；③在工作曲线上求出
3
σ相对应的浓度
X
；④
将求得的对应浓度值加上空白值即得该方法的检出限
定量限
（
1imit of
quantitationLOQ
）
?
指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和
精密度要求
?
常用信噪比法确定
定量限，一般以信噪比（
S/N
）为
1
0
∶
1
时相应的
浓度或注入仪器的量进行确定，
也可用仪器所测空白背景响应标准差
< br>（
SD
）的
10
倍为估计值，再经试验确定方法的实际测定下限
定量限：
指样品中被测物能被定量测
定的最低量，
结果应具有一定准确度和精
密度要求
?
常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（
S/N
）为
10
∶
1
时相应的
浓度或注入仪器的量进行确
定，
也可用仪器所测空白背景响应标准差
（
SD
）的
10
倍为估计值，再经试
验确定方法的实际测定下限
<
/p>
线性：
在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正<
/p>
比关系的程度。
线形通常用最小二乘法处理数据求得回归曲线的斜
率
（
Slope
）来表示。数据要求：
至少需要五个浓度考察线形，需提供
相关系数、
y
截距（是检定的可能偏差）、回归斜率及方差等参数，
应列出回归方程数和线
性图
注意：
做线性时，应注意尽量做的点多一点、线性浓度范围宽
一点，这样做的好处是：当你
在准确度考察时，你做的回收率考察的
浓度就大些，配制溶液时就容易操作些，否者，在
你做线性考察时，
你做的线性浓度范围不宽，
那么你在考察回收
率时，
你采用加入法考
察时的浓度变化范围不宽，操作浓度很难
控制，造成实际操作困难。
我碰到一个在做方法学研究的人，
由
于她在考察线性时，
做的线性浓
度不大，
在做回收率时，
加入后的量造成回收率浓度超出线性考察范
围
的浓度，
我说那样是不行的。
因为在做分析计算时又恰恰用了线
性
关系来计算，结果肯定是值得怀疑，结果是不能令人肯定的！
（这是
经验总结）
范围：
指达到一定精密度、准确度
和线性的条件下，测试方法适
用的高、
低限浓度或量的区间。<
/p>
范围应根据分析方法的具体应用和线
性、准确度、精密度结果和要
求确定。