PI染色检测细胞周期实验步骤

protocol

：

PI

染色检测细胞周期

1

、收集细胞： 胰酶（

含

EDTA

）消化收集对数生长 期细胞（加热处

理后损失多的组宜多收集细胞保证细胞有

0.5 -2

×

10

*6

个），吸取旧

培养基到一个新离心管里；少量常温

PBS

（根据培养皿大小决定量，

PBS

洗可以保 证消化效率）洗

2

次，清洗的

PBS< /p>

也要收集到上述离

心管内

【检测凋亡才需 收集旧培养基及清洗的

PBS

】

；

然后胰酶消化

（注意一定要消化完全，

显微 镜下观察细胞呈单个，

而不是成片脱落）

后利用旧培养基中和胰 酶；离心

(1000r

/300g

5min)

收集细胞沉淀。

2

、用预冷的

PBS

清 洗细胞两次。

3

、固定细胞：

用

0.5ml

预冷的

PBS

重悬细胞沉淀，使细胞充分悬浮

成单细胞，再将重悬细胞 加入

1.2ml

预冷的

99.7%

无水乙醇

(

乙醇终

浓度

70%)

，吹打混匀以免细胞团聚，

4

℃固定

2H

至过夜。

4

、细胞染色：离心（

1 000r

/300g

5min

）收集固定的细胞，以

1.8

mL

的

PBS

洗细胞一次，

离心

(

第一次实验时用

7000rpm

才把细胞离

心下来，

< br>但最后流式结果显示细胞没有碎

)

再次获取细胞沉淀后加 入

1

00

μ

l RNaseA

于

37

℃水浴

，最后加入

400

μ

lPI

避光染色

30