-
专业资料
1. Viruses such
as baculovirus can be concentrated by polyethylene
glycol precipitation.
2. Adjust the pH
of the virus-containing supernatant to 7.2-7.5.
Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000)
is
added to a final concentration of 8% (w/v).
3. Stir at 4
℃
for
2 hours.
4. Centrifuge at 10,000 x g
for 2 hours.
5. Resuspend the pellet in
a small volume of appropriate buffer ( e.g.,
RNase-free ddH2 for virus RNA
prep).
沉淀法
-
病毒提纯方法
主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒，有中性盐沉淀法、聚乙二醇
(PEG)
沉淀法、有机溶剂沉淀
法、等电点沉淀法、皂<
/p>
土法和鱼精蛋白沉淀法等。
1.
中性盐沉淀法：病毒一般在
45%
以上饱和度的硫酸铵溶液中沉淀，且保持其感染性。在含有病毒的组织培养液
中加入等体积的饱和硫酸铵，可以很容易地沉淀某些病毒如狂犬病毒、鸡新城疫病毒等。
2.
聚乙二醇沉淀法：聚乙二醇
(PEG)
为水溶性非离子型聚合
物，具有各种不同的分子量，用于病毒沉淀的主
要是
分子量为
2 000
～
6000
的
PEG
。将
PEG
配成
50
%
左右的溶液，或直接将固体
PEG
加
于病毒悬液中，使其达到所需浓
度，通常在
4
< br>℃搅拌过夜，然后离心使病毒沉淀。
Tanncock(1985
年
)
成功地用
PEG
浓缩了禽脑脊髓炎病毒。
3.
有机溶剂沉淀法：甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物等都可用于提纯病毒，但乙醚、氯仿等脂溶剂对于
具有脂质
囊膜的病毒具有破坏和灭活作用，故不适于这类病毒的浓缩提纯。
4.
等电点沉淀法：病
毒粒子在等电点时，所携带的正电荷与负电荷相互中和，因而失去相互排斥的作用而发生沉
淀。多数病毒的等电点在
pH4.5
～
5.5
之间，因此在
pH3
～
6
范围内均可沉淀，由于一部分细胞成份在等电点时亦发
生沉淀，此法效果不太理想，但从感染的组织培养液中浓缩病毒，可以获得较好结果。应用酸性范围的
等电点沉淀
或分级沉淀病毒时，必须注意
pH
< br>对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与组织蛋白电荷的差异。
5.
皂土法：
Girin(1989
年
)
应用皂土
在酸性条件下
(pH4
～
4.5)
吸附轮状病毒
SA-11
，再在碱性条
件下（
pH8.5
）
，
又使其洗脱下来，从而达到纯化目的。
< br>
6.
鱼精蛋白沉淀法：鱼精蛋白为碱性蛋白，具有携带其它蛋白质共沉淀的作用，能和直径大于
< br>50nm
的病毒共
同沉淀而不影响病毒的感染力。当向这
种沉淀物加入
1mol/LNaCl
时，病毒又重新释放到悬液
中，而鱼精蛋白仍然
沉淀。直径小于
50nm
< br>的小型病毒则不与鱼精蛋白共同沉淀。因此，可利用鱼精蛋白去除病毒材料中直径大于
50nm
的异种蛋白质。
聚乙二醇
HOCH2(CH2OCH
2)nCH2OH(n
＞
4)( Polyethylene
Glycol
简写为
PEG)
，它
的亲水性强，溶于水和许多有机
溶剂，对热稳定，有广泛围的分子量，在生物大分子制备
中，用的较多的是分子量为
6000
～
20000
的
PEG
。
PEG
< br>的沉淀效果主要与其本身的浓度和分子量有关，同时还受离子强度、溶液
pH
和温度等因素的影响。在一定的
pH
值下，盐浓度越高，所需
PEG
的浓度越低，溶液的
pH
越接近目的物的等电点，沉淀所需
PEG
的浓度越低。在
一定范围内，
高分子量和高浓度的
PEG
沉淀的效率高。
以上这些现象的理论解
释还都仅仅是假设，
未得到充分的证
实，其解释主要有：①认为
沉淀作用是聚合物与生物大分子发生共沉淀作用。②由于聚合物有较强的亲水性，使生
物
大分子脱水而发生沉淀。③聚合物与生物大分子之间以氢键相互作用形成复合物，在重力作用下形成沉淀析出。<
/p>
④通过空间位置排斥，使液体中生物大分子被迫挤聚在一起而发生沉淀。
< br>
有机聚合物沉淀的优点是：①操作条件温和，不易引起生物大分子变性；②沉淀
效能高，使用很少量的
PEG
即可以
沉淀相当多的生物大分子；③沉淀后有机聚合物容易去除。
水溶性非离子型聚合物沉淀法常用的聚合物为聚乙二醇（
PEG
）及硫酸葡聚糖。水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制尚
不清楚，大致有如下解释：①聚合物与蛋白质形成共沉物；①聚合物与蛋白质之间发生水的重分配
；①聚合物与蛋
白质形成复合物。此法受许多因素影响，主要是
pH
、离子强度、蛋白质浓度和
PEG
的分子量等。分子量为
2000
～
6
000
的
PEG
皆适宜于做蛋白沉淀用
。如若使用得当，效果甚为满意。一般认为，
PEG
浓度在
3
％～
4
％时沉淀
免疫复
合物，
6
％～
< br>7
％可沉淀
IgM
，
8
％～
12
％可沉淀<
/p>
IgG
，
12
％
～
15
％可沉淀其他球蛋白，
25
％可沉淀白蛋白。最突出的
应用是用
3
％～
4
％的
PEG
沉淀免疫复合物，
未结合的抗原和抗体留在溶液中。
按此原理设计了快速测定法和循环免
疫复合物测定法
精心整理
专业资料
从网上搜索到得关于
PEG
沉淀提纯病毒的方法，先汇总至此贴，希望大家支持本版
1
、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；
2
、
慢慢搅动并加入
NaCl
终浓度是
0.5mol/L,
有助于病毒的沉淀，
再
等量加入
10
％
PEG(
一般使用的是
PEG6000
就可以了。如果对样品
的纯度不是严格要求的话，可以建议使用
Millpore
公司
的离心浓缩柱，
Amicon
系列的可以
一次浓缩
15ml
样品。
)
；
3
、
4
℃过
夜或放置一段时间；
4
、
8000/min
离心
30
分钟，收集病毒沉淀；
5
、将病毒沉淀加入适量的
pbs
中，
4
℃过夜；
6
、
1
0000r/min
离心
1
小时
,
沉淀即为浓缩的病毒。
还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化
。
PEG
沉淀法提纯病毒
1
、用超声波或冻融的方法使细胞破
碎释放出病毒；
2
、慢慢搅动并加入
NaCl
终浓度是
0.5mol/L,
有助于病毒的沉淀，再等量加入
10
％
PEG(
一般使用的是
PEG6000
就可
以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用
Millpore
公司的离心浓缩柱，
Amicon
系列的可以一次
浓缩
15
ml
样品。
)
；
3
、
4
℃
过夜或放置一段时间；
4
、
8000/min
离心
30
分钟，收集病毒沉淀；
5
、将病
毒沉淀加入适量的
pbs
中，
4
℃过夜；
6
、
10000r/min
离心
1
小时
,
沉淀即为浓缩的病毒。
还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化
。
Concentrating virus
(PEG6000)
-----------------------------
--------------------------------------------------
-
1. Viruses such as baculovirus can be
concentrated by polyethylene glycol precipitation.
2. Adjust the
pH of the virus-containing supernatant to 7.2-7.5.
Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000)
is
added to a final concentration of 8% (w/v).
0
3.
Stir at 4
Cfor 2 hours.
4. Centrifuge at 10,000 x g
for 2 hours.
5.
Resuspend the pellet in a small volume of
appropriate buffer ( e.g., RNase-free ddH2 for
virus RNA
prep).
PEG-
it
?
慢病毒浓缩试剂
?
价
格：
￥
3802.5
?
说
明：
欢迎询价详谈
?
货
号：
LV810A-1
PEG-
it
?
慢病毒浓缩试剂
原理
<
/p>
PEG
是高分子聚合物，具有高亲水性，在溶液中会吸收大量水分
，减少病毒之间的距离，使病毒与病毒能够很容易
的聚合在一起，病毒的相对浓度提高，
达到沉淀浓缩的目的。
精心整理
专业资料
PEG-it
?
中还含有特定的
（
SBI
专属的）
缓冲液，
它能够保持病毒的活性。
少量
残留的
PEG-it
?
还会提高感染效
率，
使病毒更稳定。
图
1
使用简便快捷
只需将
5
倍的
PEG-it
?
溶液与包含病毒颗粒的细胞培养基混合离心
30
分钟，即可得到
10-100
倍的病毒浓缩液
特点
?
快捷：全程只需
30min
高效：
?
能使病毒颗粒浓缩
< br>10-100
倍
安全：
?
对所有靶细胞，包括胚胎干细胞是无毒的
?
使用方便：无需使用特别的仪器，避免了昂贵的超高速离心机
的使用，
?
只需普通离心机，低速离心即可
无残留：
?
没有细胞残片的残留
，避免对细胞的毒性和免疫原性
?
提
高转导效率：为动物转导提供高滴度的病毒
特别
?
适合大体积的病毒浓缩，解除了超滤管小量的限制
产品信息
货号
产品名称
包装体积
价格（￥）
说明
LV810A-1
PEG-it
?
Virus
Precipitation
100 mL
3802.5
适用于
400ml
慢病毒细胞上清液浓
Sol
ution (100 mL aliquot)
缩
LV825A-1
PEG-
it
?
Virus
Precipitation
250 mL
8287.5
适用于
1L
慢病毒细胞上清液浓缩
Solution
(250 mL aliquot)
纯化病
毒用终浓度
10%PEG
处理后
800
0g
离心，溶解于
PBS
。这样的方法
对吗？
PEG
沉淀的原理是什么啊？
是这样的，
纯化病毒和噬菌体都可以，
原理就
是
PEG8000
是一种高度的网状聚合物，
< br>很粘稠，
可以把病毒沉淀下来。
Catalog #
Product Name+
Size
Price
Buy Now
K904-200
K904-50
中文名称
供应商
产品报价
PEG Virus Precipitation Kit
PEG
Virus Precipitation Kit
200
preparations
$$725.00
50 preparations
$$245.00
PEG
Virus Precipitation Kit
PEG
病
毒沉淀试剂盒
(200
次
)
Biovision
￥
11600/
200
次分析
包装出来的重组病毒常
常含量很少，因此通常需要浓缩之后才能进行储存或其它应用。另外，在病
毒包装过程中
，可能会产生有毒的蛋白或生物分子杂质。因此需要一种快速、简单而便宜的方法来
浓缩
病毒，同时去除杂质。
BioVision
< br>的
PEG
病毒沉淀试剂盒提供了一种简单方便省时的方法
来浓缩病毒，无需超速离心。本
试剂盒可用于小实验样品处理或者大规模高产出、高生物
量病毒制备。本试剂盒可利用细胞培养液
或者环境样品浓缩逆转录病毒、杆状病毒、慢病
毒、噬菌体等。浓缩倍数可达
100
倍以上。试剂盒
产品货号
K904-200
背景资料
产品描述
精心整理
-
-
-
-
-
-
-
-
-
上一篇：Day 23-42
下一篇：玫瑰花要多少钱一朵多少朵代表什么意思