-
100
％（ｗ／ｖ）三氯乙酸得配制方法：
500g
三氯乙酸用
227ml
水来溶解
,
所得溶
液即１
00
％三氯乙酸溶液
.
避光
,4
度保存
.
(p
ｒ
e
ｐａ
ｒ
a
ｔ
i
ｏ
n of 100%
TCA: 454ml
H2O/kg
TCA
、
Ｍ
a
ｉ
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ｉ
n
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ｂ
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ｔ
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ｌ
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4
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ｃａ
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ｖ
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！
！
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)
、
培养基上清直接电泳跑出来得条带经常很难瞧，可以Ｔ
CA
沉
淀浓缩后跑电泳，
一般表达量大于
1
ｍ
g/ml
可以瞧到明显条带，
这就是我
用得
TCA
沉淀方法，
效果
很好：
1
、菌液
1
０
0
０
0g
，离心５分钟，收集表达上清。
2
、取
500
－１
000ul
上清于
EP
管中，加入
1
/9
体积得
10
０％
TC
Ａ，颠倒<
/p>
10
次混
匀。
3
、样品置于冰浴中大于
0
、
5
小时，过夜效果更好
.
４、
15000g
，离心
10
－
2
０分钟
,
可见有棕黑色沉淀
,
倒掉上清，将
EP
管倒扣在吸
水纸上
轻轻控几下，除去残余在管口得液体。
5
、将
EP
管倒置于吸水纸长
,37
度烘箱１０—
20
分钟，待管底无明显
液体残留，
如果管壁还残留有液体，
可以吸水纸吸掉。
可以改成室温或用电吹风，
关键就是
除去管底与
管壁残余液体
.
6
、
15000
ｇ，离心
10
－<
/p>
20
分钟
,
用<
/p>
20
ｕ
l
枪头尽
量吸去管底残余得液体
,
此步骤要
快，
不然沉淀容易散开，降低蛋白回收率，一般最多几
ul
或者没有
，注意不要
吸到沉淀
.
7
、Ｅ
P
管倒置于吸水纸长
,37
度烘箱
5
分钟，确认管壁与管底
没有液体残留。
8
、
加入
2
０－５
0ul
L
ｏ
ad
ｉｎ
g
ｂｕｆｆ
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/p>
，
9
５度加热１
0n
ｉ
m
，
一
般沉淀会
自动溶解
,
如果不溶
,
用手指轻弹管壁或用２
0ul
枪头轻轻吸打
,
注意整个操作尽量
不要碰到管壁，因为管壁可能沾有残余Ｔ
CA
。如果蓝色得
Loadin
ｇ
bu
ｆｆ
er
不变成黄色，说明残
余
TC
Ａ吸弃了干净，如果变黄
,
一般不影响电泳。此方法连
丙酮洗这一步都省了
,
而且不影响电泳效果。
或者第
５步与第
6
步改为丙酮洗：
5
、加入
200ul
冰
冷得丙酮，用手指轻弹
EP
管
,
洗去管底与管壁残余得
TCA.
6
、１
50
００
g,
离心
10
－
20<
/p>
分钟，倒掉上清
,
将
EP
管倒扣在吸水纸上轻轻控几下
,
除去残余在管口得液体
.
ＴＣ
A<
/p>
—
D
Ｏ
C
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％
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ｒ
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Ａ：
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ｍｌ
Ｈ
2O/k
ｇ
TCA
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4oC
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５０
00
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–
20oC
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5
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20oC
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ｎ
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