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蓖麻毒素的分离
、
提取及活性研究
本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研
< br>究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标
注和致谢的地方外，论
文中不包含其他人已经发表或撰写过
的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机
构的学
位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所
做的任何贡献均已在论文作了明确的说明并表示谢意。
本<
/p>
学位论文成果是本人在四川Ｉ大学读书期间在侯太平教授
指导下取
得的，
论文成果归四川Ｉ大学所有，
特此声明。
警
２００７＠ｚ衙４户ｊ／杉
四川大学硕｝。学位论文
蓖麻
毒素的分离
、
提取及活性研究
农药学专业
研究生：高杉
指导教师：侯太平
本研究以蓖麻毒素
灭鼠为目的，以小白
鼠活性实验为筛选指标，研究了从蓖麻种子中分离蓖麻毒蛋
白的方法，实现了对蓖麻毒素的最优提取，并利用得到的蓖
麻籽粗提物对
小白鼠进行灭鼠试验，来模拟高原鼠兔的灭鼠
效果评价。最终在野外大面积应用实验中，
取得了比较满意
的效果。
以蓖麻籽为
原料，通过选用不同物质做浸提剂，
单独研究了各种浸提剂对蓖麻毒素的最佳提取方法，
在综合
对各浸提剂在其最佳提取条件下的提取蓖麻毒素的效果后，
最终确定，０．２ｍｏｌ／Ｌ的磷酸缓冲液在对去皮蓖麻籽
的质量体积比为ｌ：３（ｇ
／ｍ１）时，浸提２４小时后，
所得混合物４０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，小心除去油
脂，以及离心所剩的渣滓，保留清液，在清液中加入（ＮＨ
４）
ｚＳ０４盐析剂到８０％饱和度，盐析２４小时，１０
０００ｒｐｍ离心３０ｍｉｎ，再
经透析，真空干燥后所得
蓖麻毒素（粗毒）产率最高，同时该提取方法还兼顾到蛋白
的稳定性及整个提取流程的经济性，正是要寻找的最佳工艺
路线。<
/p>
应用提取出的蓖麻毒素（粗毒）对小白鼠做活性实
验，
’
结果表明，
蓖麻毒素
对小鼠腹腔注射的ＬＤ∞为７．
９
７１ｕｇ／ｋｇ，其主要药效
成分为蓖麻毒素。蓖麻毒素使
小白鼠中毒后无明显异常反应，不容易造成拒食现象，能够
提高灭鼠效率。而小白鼠从腹腔注射后３０ｈ开始出现死
亡，直
到９６ｈ后均有死亡，说明本毒饵是高效、慢性灭鼠
刻。
针对ＪｌＩ西北高原的主要害鼠一高原鼠兔，应用蓖
麻毒素灭鼠剂进
行了野外
四川ｒ大学硕上学位论文防治实
验，在大面积实验中，该粗毒以１％浓度配制毒饵对高原鼠
兔的校正灭效为８５％以
上。小区实验的灭效在９０％左
右。通过连续半个月的观察，未发现鹰等天敌出现二次中
毒
现象，对受试绵羊也无明显影响，禁牧期后，未发现对牲畜
造
成危害。这些都充分说明，蓖麻毒素灭鼠剂在应用中是具
有安全保障的。，
上述研究结果说明，蓖麻毒素灭鼠剂作
为一种新型
的灭鼠剂，无二次中毒，对牛、羊等对非靶标生
物未见明显危害，比较安全、无残毒，不
造成环境污染。不
失为一种优良的安全无公害灭鼠剂。关键词：蓖麻毒素；提
取分离；ＬＤｓｏ；高原鼠兔；灭洞率
四ＪＩ『人学硕｝。
学位论立
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ａｎｄ
Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ
ｏｎ
Ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ
ｏｆ
Ｒａｗ
Ｔｏｘｉ
ｎ
ｏｆ
Ｒｉｃｉｏｕｓ
Ｍａｊｏｒ：Ｐｅｓｔｉｃｉｄ
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Ｓｃｉｅｎｃｅ
Ｇｒａｄｕａｔｅ：ＧＡＯ
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Ｔｕｔｏｒ：ＨＯＵ
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Ｔｈｅ
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ｔｈｅ
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ｈｉｔｅｍｏｕｓｅ’ｓ
ａｃｔｉｖｅｎｅｓｓ
ｅｘｐｅ
ｒｉｍｅｎｔ
ａｓ
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ｄｙ
ｍｅｔｈｏｄｓ
ａｎｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
ｏｆ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｏｆ
ｒｉｃｉｎ
ｆｒｏｍ
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ｃａｓｔｅｒ
ｂｅａｎ．Ｆｉｎａｌ
ｌｙ，ｆｉｎｄｏ
ｕｔ
ｔｈｅ
ｏｐｔｉｍｕｍ
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ｏｆ
ｅｘｔｒａｃ
ｔｉｏｎ．ａｎｄ
ｕｓｉｎｇ
ｔｈｅ
ｃｒｕｄｅ
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ｒａｃｔ
ｏｆ
ｒｉｃｉｎ，Ｉ
ｓｔｕｄｙ
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ｋｉ
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ｔｏ
ｔｈｅ
ｗｈｉｔｅ
ｍｏｕｓｅ，ｓｉｍｕｌａｔｅｄ
ｔｈｅ
ｐｌａｔｅａｕ
ｒｏｄｅｎｔｓ
ｔｏ
ｄｅｒａｔｉｚａｔｉｏｎ
ｅｆｆ
ｅｃｔ
ａｐｐｒａｉｓａｌ．Ａｔ
ｌａｓｔ，ｉｎ
ｔｈ
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ａｐｐｌｌｅｄｅｘｐｅｒ
ｉｍｅｎ
ｔ，ｔｈｉｓ
ｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅ
ｈａｓ
ｏｂｔａ
ｉｎｅｄ
ｔｈｅ
ｑｕｉｔｅ
ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ
ｅｆｆｅｃｔ．
Ｃｈｏｏｓｅ
ｃａｓｔｅｒ
ｂｅａｎ
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ｓ
ｔｈｅ
ｒａｗ
ｍａｔｅｒｉａｌ。ｔｈｒｏｕｇｈ
ｓ
ｅｌｅｃｔｓ
ｔｈｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒ
ａｃ
ｔｉｎｇ
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ｔｏ
ｓｏａｋ，ａｆｔｅｒ
ｓｔ
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ｍｅｔｈｏｄ
ｏｆ
ｗｉｔｈｄ
ｒａｗｉｎｇｒｉｃｉｎ
ｂｙ
ｅａｃｈ
ｋｉｎｄｓ
ｏ
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ｔ
ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ
ａｇｅｎｔｓ，ａｎｄ
ｃｏ
ｎｔｒａｓｔ
ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｅｆｆｉｃａｃｙ
ｕｎｄｅｒ
ｔｈｅ
ｂｓｅｔ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｆｉ
ｎａｌｌｙ
ｄｅｔｅｒｍｉｎ，ｔｈｅ
ｏｐｔｉｍｕｍ
ｍｅｔｈｏｄｏｆ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｉｓ：ｅｘｔｒ
ａｃｔｅｄ
ｗｉｔｈ
０．２ｍｏｌ／Ｌ
ＰＢＳ（ｃａｓ
ｔｅｒ
ｂｅａｎ：ＰＢＳ，ｑｕａｌｉｔｙｖｏｌｕｍｅ
ｒａｔｉｏ
ｉｓ
Ｉ：３（ｇ／ｍ１）），Ａｆｔｅｒ
ｓ
ｏａｋ
ｆｏｒ
２４
ｈｏｕｒｓ，ｏｂｔａｉｎｅｄ
ｍｉ
ｘｔｕｒｅ４０００
ｒｐｍ
ｃｅｎｔｒｉ
ｆｕｇａｔｅ
ｄ
３０ｍｉｎ，ｄｅｇｒｅａｓｅ
ｃａｒｅｆｕｌ
ｌｙ，
ｒｅｍｏｖｅ
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ｓｅｄｉｍｅｎｔ油ｉｃｈ
ｔｈｅ
ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ
ｒｅｍａｉｎｓ，ｋｅｅｐ
ｔｈ
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ｃｌｅａｒ
１
ｉｑｕｉｄ，ａｎｄ
ｕｓｅ（ＮＨ４）
２Ｓ幽ｓａｌｔｅｄ
ｏｕｔ
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ｔｈｅ
１
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８０％ｄｅｇｒｅｅ
ｏｆ
ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ，
Ａｆｔｅｒ
ｓａｌｔｉｎｇ—ｏｕｔ
３
四川大学硕｝：
学位论文２４
ｈｏｕｒｓ，ｉ００００
ｒｐｍ
ｃｅｎｔ
ｒｉｆｕｇａａｔｅ
３０ｍｉａ，ｄｉａｌｙｓｉｓ
ａｎ
ｄ
ｖａｃｕｕｍ
ｄｒｙｉｎｇ．ｔｈｅ
ｐｒｏｄｕｃｔｉ
ｏｎ
ｒａｔｅ
ｏｆ
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ｅｘｔｒａ
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ｈｉｇｈｅｓｔ，ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ
ｌｙ
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ｍｅｔｈｏｄ
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ｇｉｖｅ
ｄｕａｌ
ａｔｔｅｎｔｉｏｎ
ｔｏ
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ｒｏｔｅｉｎ
ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
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ｍｅｔｈｏｄ．Ｓｏ
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ｔｈｅ
ｂｅｓｔｃｒａｆｔ
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ｓｅｅｋｅｄ．
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ｒｉｃｉｎ（ｃｒ
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ａｃｔｉｖｅｎｅｓｓｅ
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ｅｎｔ，ｆｉｎａｌｌｙ
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Ｌ
Ｄ５０
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ｉｎｊｅｃｔｓ
ｔ
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ｔｈｅｍｏｕｓｅ
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ｃａｖｉｔｙ
ｉｓ
７．９７１
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ｍａｉｎ
ｃｏｍｐ
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ｏｆ
ｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅｉｓ
ｒｉｃｉ
ｎ．Ａｆｔｅｒ
ｔｈｅ
ｒｉｃｉｎ
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ｔｈｅ
ｗｈｉｔｅ
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ｈｅ
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ｍｏｕｓｅ
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３０ｈ
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９６ｈ．
Ｉｎ
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ｍｏｕｓｅ…Ｏｃｈｏｔｏｎａ
ｃｕｒｚｏｎ
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ｍａｉｎ
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ｒｅｓｕｌｔｓ
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ｋｉｌｌｉｎｇ
ｒ
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Ｏｃｈｏｔｏｎａ
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Ｓ
ａｂｏｕｔ
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ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｉｎ
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ｎａｔｕｒａ
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ｈａｗｋ．Ｔｈｅ
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ｓｈｅｅｐ
ａｌＳＯ
ｎｏｔ
ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ
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ｏ
ｂｅ
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ｐｒｏｈｉｂｉ
ｔｉｏｎ
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ｐｅｒｉｏｄ，ｗｅ
ｈａ
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ｎｏｔ
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ｒｏｄｅｎｔｉｃｉ
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ｉｎｇ，
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ｒｏｄｅｎｔｉｃ
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ｔｏ
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ｅｙ
ｗｏｒｄｓ：ｒｉｃｉｎ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ａ
ｎｄ
ｓｅ
ｐａｒａｔｉｏｎ，ＬＤｓ０，Ｏｃｈｏｔｏｎ
ａ
ｃｕｒｚｏｎｉａｅ，
ｔｈｅ
ｋｉｌｌｉｎｇ
ｒａｔ
ｅ
ｆｏｒ
Ｏｃｈｏｔｏｎａ
ｃｕｒｚｏｎｉａｅ
４
【『ｑ川人学硕Ｉ：学位论文
前言
蓖麻（Ｒｉｃｉｎｕｓ
ｃｏｍｍｕｎＹｓ
Ｌ．）属大戟科蓖
麻属，是十大油料作
物之一。我国蓖麻种植面积约４７万公顷，蓖麻籽年产量３
０万吨，居世界第２位。蓖麻籽榨油后的饼粕富含多种氨基
酸、矿物质，
可作为牲畜的优良饲料，但蓖麻籽中含有的蓖
麻碱、毒蛋白、变应原和血球凝集素等毒素
对牲畜有较强的
毒性，不能直接被利用。因此，寻找有效提取蓖麻籽中的毒
素的方法将会极大地提高蓖麻资源的综合利用程度，产生更
大的经济和生态效
应。
蓖麻毒蛋白（Ｒｉｃｉｎ）是蓖麻
种子中的一种毒蛋白，含量占籽重的１％－５％。在１８８
７年，Ｄｉｘｓｏｎ首次证
明了蓖麻籽的毒性是由一种蛋白
引起的：１９世纪后叶，Ｓｔｉｌｉｍａｒｋ详细地研究
了
这种毒素蛋白，并建议命名为“Ｒｉｃｉｎ”。此后，蓖麻
毒
蛋白的理化性质和生物学特性引起了许多生化学家的兴
趣和关注。研究表明，蓖麻毒蛋白
对所有哺乳动物的有核细
胞都有毒害作用，它通过抑制蛋白质合成来杀死癌细胞，这
使它在医学上成为用于杀伤肿瘤细胞的候选毒素之一。Ｒｉ
ｃｉｎ是
迄今为止天然药中最毒的蛋白之一，几乎对所有真
核细胞都有毒性。它以往主要用于治疗
肿瘤的研究，在作为
灭鼠剂应用上尚未见报道。
有资料显示，川西北高寒草场
鼠害分布面积达２７０万公顷，
占可利用面积的２０．
１％。
而高原鼠兔是川西北高原
的主要害鼠之一，它们群栖穴居，
具有强烈的挖掘活动和以植物为食的生态特征，使其作
用集
中表现在对植被和土壤的影响上。尤其是由于它们营群居生
活，在一定范围内大量集中，生物量特大，危害极为严重，
是草原上的主要害鼠。鼠兔大
量存在，导致草场的退化，不
但给当地畜牧业带来很大经济损失，更严重的是加速了草原
的退化，引起土壤沙化，水土流失严重，草原生态系统收到
严重
的破坏。若尔盖草原湿地是长江与黄河的分水岭，它是
世界上最大的“固体高原水库”。
因为湿地受到破坏，若尔
盖沙化严重。有专家忧虑，如沙化问题不加治理，不到２０
年，整个若尔盖草原将成为高原沙漠，引发的沙尘暴将“光
顾”成都
平原。
多年来有关鼠害防治，国内外普遍采取化
学防治策略。人们曾长期使用天
列Ｊ１１人学硕士
学位论
文然物质如红海葱、马钱子碱等灭鼠，以后逐渐使用一些新
单质和化合物如黄磷、氰化物、氟乙酸钠、氟乙酰胺等急性
杀鼠剂。在上世纪４０年代
末，人们开始使用抗凝血剂（Ａ
ｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ
<
/p>
ｒｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅｓ）
用于灭鼠。
目前广泛使用第二代抗凝血剂有鼠德克、
澳敌隆、
大隆、杀它仗
和硫敌隆等。化学灭鼠剂在当前鼠害防治中被
广泛制成毒饵，
用
于防治家栖和野栖鼠类，
具有高效、
省工、
方便等优点，在目前的鼠害防治工作中，占有重要的地位，